春節(jié)標(biāo)語(yǔ)大全11篇

緒論：寫(xiě)作既是個(gè)人情感的抒發(fā)，也是對(duì)學(xué)術(shù)真理的探索，歡迎閱讀由發(fā)表云整理的11篇春節(jié)標(biāo)語(yǔ)范文，希望它們能為您的寫(xiě)作提供參考和啟發(fā)。

篇（1）

3. 歡天喜地迎新春，尊老愛(ài)幼促和諧!

4. 裝點(diǎn)天下商通四海，業(yè)精于勤日日高升!

5. 貫徹落實(shí)科學(xué)發(fā)展觀，建設(shè)文明和諧新xx!

6. 文明過(guò)新年，快樂(lè)每一天!

7. 弘揚(yáng)傳統(tǒng)美德，建設(shè)和諧社會(huì)!

8. 堅(jiān)定發(fā)展信心，鼓足超越勇氣，推動(dòng)發(fā)展!

9. 建設(shè)文明和諧新xx，再創(chuàng)xx新輝煌!

10. 群策群力，迎難而上，推動(dòng)經(jīng)濟(jì)社會(huì)持續(xù)健康發(fā)展!

11. 開(kāi)拓創(chuàng)新，與時(shí)俱進(jìn)，科學(xué)發(fā)展，安全發(fā)展，轉(zhuǎn)型發(fā)展，跨越發(fā)展!

12. 恭祝全體員工及家屬新春快樂(lè)、闔家幸福!

13. 以我文明新貌，喜迎文明盛會(huì)!

14. 搶抓新機(jī)遇，增創(chuàng)新優(yōu)勢(shì)，再創(chuàng)新輝煌!

15. 牢固確立科學(xué)發(fā)展觀，在科學(xué)發(fā)展中率先發(fā)展!

16. 深入解放思想，推動(dòng)科學(xué)發(fā)展，共鑄改革輝煌，同享發(fā)展碩果!

17. 解放思想開(kāi)拓創(chuàng)新 為建設(shè)富有魅力的現(xiàn)代化企業(yè)而努力奮斗!

18. 牢固確立科學(xué)發(fā)展觀，在科學(xué)發(fā)展中率先發(fā)展

19. 匯聚百川、服務(wù)兩港、創(chuàng)新開(kāi)拓、勇立潮頭

20. 搶抓新機(jī)遇，增創(chuàng)新優(yōu)勢(shì)，再創(chuàng)新輝煌

21. 裝點(diǎn)天下商通四海，業(yè)精于勤日日高升

22. 年年歲歲花不同，歲歲朝朝人依在

23. 搶抓新機(jī)遇，爭(zhēng)創(chuàng)新優(yōu)勢(shì)，再創(chuàng)新輝煌

24. 張燈結(jié)彩迎新年，齊心協(xié)力譜新篇

25. 張燈結(jié)彩歡度佳節(jié)，齊心協(xié)力共創(chuàng)偉業(yè)城市，讓生活更美好

26. 堅(jiān)持科學(xué)發(fā)展和諧發(fā)展，努力把xx建設(shè)成為民富區(qū)強(qiáng)、文明和諧的現(xiàn)代化xx新城

27. 建設(shè)社會(huì)主義新農(nóng)村，共創(chuàng)xx美好家園

28. 堅(jiān)持黨的群眾路線，全心全意為人民服務(wù)

29. 新年伊始，向各行各業(yè)的建設(shè)者致敬

30. 新年快樂(lè),佳節(jié)如意!

31. 歡度春節(jié)，祝福萬(wàn)家

32. 迎新年，講文明，樹(shù)新風(fēng)，促和諧

33. 以科學(xué)發(fā)展觀統(tǒng)領(lǐng)全局，推動(dòng)xx經(jīng)濟(jì)社會(huì)又好又快發(fā)展

34. 世界文明的盛會(huì)，我們大家的世博

35. 以我文明新貌，共慶新春佳節(jié)，喜迎世博盛會(huì)

36. 文明的城市、歡慶的佳節(jié)，美好的生活

37. 在新的一年新的開(kāi)始新的起點(diǎn)新的征程

38. 年年順景財(cái)源廣歲歲平安福壽多

39. 與時(shí)俱進(jìn)弘揚(yáng)xx精神，萬(wàn)眾一心構(gòu)建和諧港城

40. 耄耊之年，風(fēng)采猶存!富如東海，壽比南山!

41. 運(yùn)籌帷幄雄心開(kāi)創(chuàng)千秋業(yè) 達(dá)權(quán)知變妙筆描繪萬(wàn)代春

42. 大吉大利過(guò)新年，事業(yè)成功輝煌年!

43. 匯聚百川、服務(wù)兩港、創(chuàng)新開(kāi)拓、勇立潮頭

44. 一干二凈除舊習(xí)五講四美樹(shù)新風(fēng)

45. 春色明媚山河披錦繡華夏騰飛祖國(guó)萬(wàn)年輕

46. 五更分兩年年年稱心一夜連兩歲歲歲如意

47. 求真務(wù)實(shí)抓轉(zhuǎn)型，全心全力搞跨越!

篇（2）

2. 春色明媚山河披錦繡華夏騰飛祖國(guó)萬(wàn)年輕

3. 五更分兩年年年稱心一夜連兩歲歲歲如意

4. 求真務(wù)實(shí)抓轉(zhuǎn)型，全心全力搞跨越!

5. 祝各位在新的一年里：身體健康，萬(wàn)事如意!

6. 一干二凈除舊習(xí)五講四美樹(shù)新風(fēng)

7. 聚精會(huì)神搞建設(shè)，一心一意謀發(fā)展

8. 喜迎猴年!歡度新年!再接再勵(lì)!再創(chuàng)輝煌!

9. 歡天喜地迎新春，尊老愛(ài)幼促和諧!

10. 文明過(guò)新年，快樂(lè)每一天!

11. 張燈結(jié)彩迎新年，齊心協(xié)力譜新篇

12. 張燈結(jié)彩歡度佳節(jié)，齊心協(xié)力共創(chuàng)偉業(yè)城市，讓生活更美好

13. 新年伊始，向各行各業(yè)的建設(shè)者致敬

14. 群策群力，迎難而上，推動(dòng)經(jīng)濟(jì)社會(huì)持續(xù)健康發(fā)展!

15. 開(kāi)拓創(chuàng)新，與時(shí)俱進(jìn)，科學(xué)發(fā)展，安全發(fā)展，轉(zhuǎn)型發(fā)展，跨越發(fā)展!

16. 恭祝全體員工及家屬新春快樂(lè)、闔家幸福!

17. 建設(shè)社會(huì)主義新農(nóng)村，共創(chuàng)xx美好家園

18. 堅(jiān)持黨的群眾路線，全心全意為人民服務(wù)

19. 張燈結(jié)彩迎新年，齊心協(xié)力譜新篇!

20. 堅(jiān)持科學(xué)發(fā)展和諧發(fā)展，努力把xx建設(shè)成為民富區(qū)強(qiáng)、文明和諧的現(xiàn)代化xx新城

2017年歡度春節(jié)宣傳標(biāo)語(yǔ)（簡(jiǎn)單篇）

1. 春滿人間民泰安。

2. 人壽年豐喜事多。

3. 神駒騰躍吉祥年。

4. 梅花香遍神州地。

5. 堅(jiān)持科學(xué)執(zhí)政民主執(zhí)政依法執(zhí)政，全力構(gòu)建和諧社會(huì)。

6. 山青水秀風(fēng)光好。

7. 慶佳節(jié)，創(chuàng)新業(yè)，奪取全市改革開(kāi)放和現(xiàn)代化建設(shè)新勝利。

8. 歡歡喜喜過(guò)節(jié) 平平安安過(guò)節(jié)

9. 新年伊始，向各行各業(yè)的建設(shè)者致敬

10. 過(guò)歡樂(lè)春節(jié) 文明春節(jié) 做文明市民

11. 歡度春節(jié)，祝福萬(wàn)家

12. 辭舊迎新 來(lái)年更上一層

13. 張燈結(jié)彩迎新年，齊心協(xié)力譜新篇。

14. 瑞雪映兆豐稔歲。

15. 牢固確立科學(xué)發(fā)展觀，在科學(xué)發(fā)展中率先發(fā)展。

16. 笛弄梅花曲。

17. 華人歡度萬(wàn)榮春。

18. 龍族喜迎千禧歲。

19. 瑞雪兆豐年。

20. 鶯歌綠柳樓前。

21. 政協(xié)人和天地春。

22. 跨越江河架宏橋。

23. 東風(fēng)迎新歲。

24. 兔降葡旗別澳門(mén)。

25. 龍游滄海江湖小。

26. 文明過(guò)新年，快樂(lè)每一天!

27. 歡天喜地迎新春，尊老愛(ài)幼促和諧!

篇（3）

3、推動(dòng)移風(fēng)易俗，樹(shù)立文明鄉(xiāng)風(fēng)。

4、節(jié)儉是良知，“光盤(pán)”是美德。

5、勤儉節(jié)約不能忘，鋪張浪費(fèi)要摒棄。

6、唯誠(chéng)唯信行世事，克儉克勤踐家風(fēng)。

7、相親相愛(ài)家庭和睦，互諒互幫鄰里溫馨。

8、行路看紅燈，垃圾不亂扔，坐車(chē)讓老人，處處講文明。

9、走文明路，開(kāi)文明車(chē)，做文明人，創(chuàng)文明城。

10、一路禮讓一路行，一路文明一路情。

11、一花一木皆是景，一言一行要文明。

12、樹(shù)立環(huán)境保護(hù)意識(shí)，建設(shè)綠色文明家園。

篇（4）

3、我會(huì)給你送一個(gè)不同平日的祝福，因?yàn)檫@四字一年只說(shuō)一次：元旦快樂(lè)!

4、千萬(wàn)要平安！我深感明白，偶前面的路艱難而又漫長(zhǎng)，我不可能也沒(méi)有時(shí)間來(lái)回報(bào)你們的那份牽掛和關(guān)愛(ài)。

5、新的一年，希望你財(cái)富賊多，事業(yè)賊火，身體賊棒，家庭賊旺，一切賊順，雞年賊牛!

6、恭祝春節(jié)快樂(lè)。祝你年年圓滿如意，月月事事順心，日日喜悅無(wú)憂，時(shí)時(shí)高興歡喜，刻刻充滿朝氣!

7、愛(ài)情的基礎(chǔ)，是勇氣；友情的基礎(chǔ)，是義氣；親情的基礎(chǔ)，是和氣；生活的基礎(chǔ)，是喜氣；祝福的基礎(chǔ)，是豪氣；新年到，愿你事業(yè)有財(cái)氣，快樂(lè)有福氣！

8、又饞了吧，新年喝一盅吧!要知道母親有一個(gè)不肯哭、不肯服輸、不示弱的女兒，要想用她所有的心血換回一份安閑平穩(wěn)的將來(lái)，借此來(lái)報(bào)效蒼老多病的雙親和冀我以希望的姐妹親朋。

9、快樂(lè)時(shí)有你的祝福，失意時(shí)有你的安撫，遇到你是我的幸福，人生有你我已知足，在新的一年里，讓我們共同來(lái)祝福彼此，新年快樂(lè)!

10、分別幾日，新春到來(lái)。愿領(lǐng)導(dǎo)春節(jié)一切好，接福納財(cái)心歡笑。 春節(jié)到了，想想沒(méi)什么送給你的，又不打算給你太多，只有給你五千萬(wàn)：千萬(wàn)快樂(lè)！

11、煩惱憂愁不再來(lái)，福星財(cái)神相對(duì)拜。新年快樂(lè)，恭喜發(fā)財(cái)！短信祝福，依依情在。

12、千萬(wàn)不要忘記我！ 大地回暖春節(jié)來(lái)，小橋流水百花開(kāi)。人壽年豐又一春，生活美滿笑顏開(kāi)。

13、或許給您拜年的人已經(jīng)排成了長(zhǎng)隊(duì)，新年到放鞭炮，拱拱手祝福好，身體棒樂(lè)陶陶，事業(yè)成薪水高，夫妻間分紅包，兄弟間酒不少，敬長(zhǎng)輩送補(bǔ)藥，會(huì)親友真熱鬧，送舊符展新貌，春節(jié)樂(lè)天天笑!

14、駛?cè)肫桨部鞓?lè)道，淌過(guò)吉祥如意河。馬年來(lái)，馬年嗨，蛇年祝福最精彩，愿你如馬般舞出自己的錦繡前程，如馬般游出自己的甜美愛(ài)情，如馬般點(diǎn)燃自己的美麗心情。

篇（5）

中圖分類號(hào)：I053.5

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A文章編號(hào)：1009－4474(2012)04－0043－05

The Cultural Symptoms and Decoding of Youth Idol Drama

——Analysis Based on the Theory of John Fiske

YAN Qing， ZHU Jing-wen

(Department of Literature and Journalism, Sichuan University, Chengdu 610064, China)

Key words: Youth Idol Drama; John Fiske; ideologies; ideograph; intertextuality; Post Modernism

Abstract: Youth Idol Drama as a type of TV play closely interacts with business and economic logic, and its artistic generation and acceptance are both deeply influenced by the post modernism thoughts. In the light of John Fisks Symbol theory, TV “bardic” ideographic theory, intertextuality theory of horizontal and vertical dimensions and so on, the creation and acceptance of the Youth Idol Drama can be interpreted as the ideology knitted with the illusion of the reality. In the dissemination, the selection of strategy for daily visual bardic is to be made through the audiences individual decoding in the acceptance and the visual spectacle and entertainment carnival of the Youth Idol Drama are thus completed.

青春偶像劇（以下簡(jiǎn)稱偶像劇）是電視劇藝術(shù)中受商業(yè)邏輯和經(jīng)濟(jì)邏輯影響最深刻的類型，是后現(xiàn)代體驗(yàn)下生活鏡像和意義建構(gòu)的獨(dú)特形態(tài)。偶像劇以時(shí)尚性、奇異性表征系統(tǒng)將受眾定位于追新求異的青少年人群，并力圖通過(guò)電視劇文本符碼的日常化影像編織將現(xiàn)實(shí)的意識(shí)形態(tài)最大化呈現(xiàn)。費(fèi)斯克用符號(hào)學(xué)原理剖析電視（節(jié)目）文本，闡釋了電視用符碼來(lái)建構(gòu)意義，并將生產(chǎn)者、文本和觀眾三者勾連起來(lái)，實(shí)現(xiàn)了從意義的建構(gòu)到符碼表意的視像傳播，再到受眾的個(gè)性化解碼的動(dòng)態(tài)而開(kāi)放的意義生態(tài)圈和循環(huán)系統(tǒng)，為偶像劇的傳播理念、意義編織和接受等提供了新穎的視角和理論價(jià)值。

一、意識(shí)形態(tài)的編織和幻化呈現(xiàn)

偶像劇運(yùn)用符碼單位構(gòu)建青少年日常生活情境的敘事文本，以電視媒介為傳播載體進(jìn)行一種視像化的意義傳達(dá)，最終通過(guò)一系列視像化的符碼表意和隱喻完成了文本意義的游移升華。費(fèi)斯克在《解讀電視》、《電視文化》等著作中巧妙地將索緒爾、巴特等人的符號(hào)理論融入電視媒介，創(chuàng)造性地將電視符碼分為了“現(xiàn)實(shí)”、“表現(xiàn)”和“意識(shí)形態(tài)”三個(gè)等級(jí)。

在第一層級(jí)“現(xiàn)實(shí)”中，符碼代表了其初始意義，亦即索緒爾符號(hào)學(xué)中的“能指”效用。偶像劇中這些符碼取自現(xiàn)實(shí)客觀世界，是受眾熱捧事物的擇取，如青春靚麗的俊男美女、時(shí)尚多變的服飾妝容、現(xiàn)代化的都市建筑等。“現(xiàn)實(shí)”層面的電視劇符碼所建構(gòu)的影視文本盡管只是對(duì)現(xiàn)實(shí)世界的部分選擇，但是在一定程度上實(shí)現(xiàn)了視像的真實(shí)性，滿足了電視受眾的日常化觀賞訴求。湖南衛(wèi)視自拍劇《一起來(lái)看流星雨》中的男女主角就均為戲劇學(xué)院的本科學(xué)生，沒(méi)有明星光環(huán)的他們與普通的青少年受眾縮短了距離，因此他們的出場(chǎng)就更像是校園親歷而非表演。美國(guó)偶像劇《緋聞女孩》中，現(xiàn)代都市風(fēng)貌的符碼較之中韓兩國(guó)更為突出，無(wú)論是男女主角居住的豪華別墅或商務(wù)樓，還是舞會(huì)派對(duì)中豪華的廳堂裝潢，抑或配合情節(jié)呈現(xiàn)的風(fēng)景勝地，無(wú)不以攝像機(jī)為眼、電視為介來(lái)完成敘事文本符碼的建構(gòu)。

第二層級(jí)的“表現(xiàn)”是通過(guò)技術(shù)使日常符碼的表意上升到文化層次——在社會(huì)共享符碼的關(guān)聯(lián)下形成了偶像劇的符號(hào)所指。這種通過(guò)技術(shù)形成的敘事文本可以稱為技術(shù)符碼，包括攝像技術(shù)的運(yùn)用，如鏡頭寫(xiě)意、畫(huà)面剪輯、聲畫(huà)效果等，可以更好地完成“現(xiàn)實(shí)”層面日常符碼表意的提升。偶像劇中技術(shù)符碼的運(yùn)用主要體現(xiàn)為聲畫(huà)演繹人物性格、鏡頭寫(xiě)意軀體和類軀體鏡像、畫(huà)面營(yíng)造都市幻象三個(gè)方面。首先，聲畫(huà)演繹人物性格是通過(guò)聲音和畫(huà)面的運(yùn)用來(lái)實(shí)現(xiàn)符碼表意的深化，將俊男美女視像化的日常符碼表意提升到了無(wú)法用語(yǔ)言表達(dá)的內(nèi)心層面。偶像劇的對(duì)白和音樂(lè)，無(wú)論是幽默風(fēng)趣還是詩(shī)意唯美，都充分運(yùn)用了語(yǔ)言內(nèi)在的戲劇張力，營(yíng)造輕松浪漫的氛圍，積淀觀影情緒，從而推動(dòng)情節(jié)的發(fā)展和人物塑造。《緋聞女孩》就借用當(dāng)紅歌星Lady Gaga的歌曲作為影片的背景音樂(lè)，從而有效地提升了劇作的時(shí)尚性和流行度。其次，鏡頭寫(xiě)意軀體和類軀體鏡像是指用鏡頭語(yǔ)言如特寫(xiě)或者推拉搖移等來(lái)突出劇中人物軀體和類軀體的視覺(jué)呈現(xiàn)，由此來(lái)建構(gòu)偶像劇特有的視覺(jué)化、時(shí)尚化、都市化的青春幻象。軀體鏡語(yǔ)是指身體包括人物神態(tài)、動(dòng)作、裝扮等在內(nèi)的人物形象的呈現(xiàn)，它是以人物靚麗的容貌、完美的身材和時(shí)尚的裝扮來(lái)塑造偶像的崇高地位的。再次，畫(huà)面營(yíng)造都市幻象則是通過(guò)畫(huà)面的剪輯技巧輔以鏡頭語(yǔ)言來(lái)完成都市幻象，如酒吧、豪華餐廳、星級(jí)酒店等營(yíng)造出偶像劇的背景環(huán)境，為偶像劇塑造夢(mèng)幻卻又高度仿真的環(huán)境現(xiàn)場(chǎng)。而韓國(guó)偶像劇《拜托小姐》中女主角居住的豪宅、休閑娛樂(lè)的高爾夫球場(chǎng)、辦公的豪華商務(wù)大樓則成為了偶像劇的類軀體敘事，在輔助軀體敘事的同時(shí)交代環(huán)境背景，其營(yíng)造的都市幻象一方面為達(dá)成受眾的情感共鳴做鋪墊，另一方面則通過(guò)這種高度物質(zhì)化、視像化的呈現(xiàn)方式達(dá)到陌生化效果，為受眾崇拜心理的激發(fā)劃定了最佳的觀賞距離。無(wú)論是軀體鏡語(yǔ)還是類軀體鏡語(yǔ)，在偶像劇中都成為滿足受眾偶像崇拜訴求的最佳話語(yǔ)呈現(xiàn)方式，也成為了建構(gòu)消費(fèi)景觀、擬造超仿真社會(huì)的最佳路徑。

第三層級(jí)的“意識(shí)形態(tài)”架構(gòu)于“現(xiàn)實(shí)”能指與“表現(xiàn)”所指共同塑造的符碼意指之上，是一種高于文化層面的世界觀、價(jià)值觀的符碼表意。偶像劇的“意識(shí)形態(tài)”主要以電視文本符碼的隱喻、轉(zhuǎn)喻等方式體現(xiàn)地域文化差異，在潛移默化中形成獨(dú)特的意識(shí)形態(tài)符碼，有利于受眾的識(shí)別進(jìn)而引發(fā)共鳴。中國(guó)偶像劇在含蓄委婉的敘事文本符碼、相對(duì)保守的軀體符碼中充盈了進(jìn)取向上的精神。比較有代表性的影片《奮斗》，沒(méi)有夢(mèng)幻的童話情節(jié)，但同樣敘寫(xiě)了青年一代青春激昂的奮斗與情感歷程。即使是陷入偶像劇套路的《一起來(lái)看流星雨》等劇，與相同題材的韓國(guó)版、日本版《花樣少男少女》相比，也同樣少了夢(mèng)幻，而多了對(duì)現(xiàn)實(shí)生活的寫(xiě)照與人物成長(zhǎng)軌跡的描繪。韓國(guó)偶像劇在軀體符碼上突出的表現(xiàn)則從側(cè)面烘托出韓國(guó)當(dāng)下明顯的消費(fèi)轉(zhuǎn)向痕跡，《浪漫滿屋》、《加油小姐》、《咖啡王子一號(hào)店》等韓國(guó)偶像劇無(wú)一例外地都塑造了完美靚麗、時(shí)尚與智慧并存的男女主角，他們從服飾到妝容搭配都成為了潮流時(shí)尚的引領(lǐng)者，無(wú)不刺激著受眾的消費(fèi)欲望。在韓劇所營(yíng)造的時(shí)尚帝國(guó)中，人們似乎必須消費(fèi)才能生存。美國(guó)的偶像劇在都市環(huán)境營(yíng)造上的技術(shù)優(yōu)勢(shì)，傳達(dá)了其以現(xiàn)代化為誘餌的霸權(quán)文化的滲透效果。高聳云端的商務(wù)寫(xiě)字樓、開(kāi)闊堂皇的私家別墅、豪華奢侈的購(gòu)物廣場(chǎng)……現(xiàn)代化都市的一切標(biāo)記對(duì)于任何一個(gè)非美國(guó)人來(lái)說(shuō)都很常見(jiàn)，而《緋聞女孩》中呈現(xiàn)的男女青年之間直白的亂性、物欲橫流的社會(huì)風(fēng)貌以及非人性的暴力沖突仍舊在不遺余力地傳達(dá)一種美國(guó)式生活方式，不管這種奢靡混亂的生活方式是多么地不堪。

二、日常生活的后現(xiàn)代表達(dá)與傳播

在費(fèi)斯克看來(lái)，電視具備的“吟詠功能”(bardic function)順利實(shí)現(xiàn)了敘事文本的傳遞。電視的吟詠功能類似于中世紀(jì)的游吟詩(shī)人的作用——“利用既有語(yǔ)言把當(dāng)時(shí)社會(huì)的生活作息，整理組織出一套又一套的故事或訊息，并強(qiáng)化肯定了聽(tīng)者對(duì)自己以及對(duì)自己文化的感受。”〔1〕在當(dāng)下后現(xiàn)代思潮的背景下，電視的“吟詠功能”對(duì)人們的身份認(rèn)同和文化歸屬發(fā)揮了重要作用。所謂后現(xiàn)代，是一個(gè)相對(duì)于現(xiàn)代性的概念，但是這種概念并非在時(shí)間、序列上進(jìn)行區(qū)別〔2〕。在此我們更多的是將后現(xiàn)代看為一種對(duì)世界的態(tài)度，一種思考和感受的方式或行為，它質(zhì)疑客觀真理、理性、同一性和客觀性等，不信任任何單一的理論框架、大敘事或終極性解釋。而電視的“吟詠功能”是在題材選擇、符號(hào)修辭、傳播技術(shù)等后現(xiàn)代認(rèn)可的基礎(chǔ)上實(shí)現(xiàn)傳播與接受的。

在題材選擇上，偶像劇通過(guò)對(duì)經(jīng)典文本的“后現(xiàn)代摹寫(xiě)”鎖定文化范圍，奠定收視根基。作為20世紀(jì)以來(lái)的重要文化現(xiàn)象，偶像劇的創(chuàng)作深受后現(xiàn)代思潮的影響，在表達(dá)方式上呈現(xiàn)出明顯的后現(xiàn)代傾向——在內(nèi)容上對(duì)經(jīng)典文本的創(chuàng)造性摹寫(xiě)與在形式上對(duì)經(jīng)典文本的模仿、拼貼，借經(jīng)典文本的受眾基礎(chǔ)為新的偶像劇預(yù)設(shè)收視期待。經(jīng)典文本的后現(xiàn)代摹寫(xiě)，是借鑒利用經(jīng)典文本中的素材，根據(jù)現(xiàn)代青少年群體的審美標(biāo)準(zhǔn)和創(chuàng)作者的傳播需求來(lái)進(jìn)行篩選、加工創(chuàng)作全新的電視劇本。改寫(xiě)后的偶像劇擯棄了經(jīng)典文本中深刻的思想內(nèi)涵，力求以通俗、淺顯的方式達(dá)到最優(yōu)化的定位傳播。法國(guó)后現(xiàn)代主義代表人物里奧塔爾曾將后現(xiàn)代主義定義為“針對(duì)元敘事的懷疑態(tài)度”〔3〕。而偶像劇的受眾被定位為一群勇于接受新思潮、敢于顛覆傳統(tǒng)的青少年人群，該劇種的訴求本身就含有對(duì)元敘事持懷疑、顛覆以至批判的態(tài)度，因此，偶像劇在題材的選取、內(nèi)容的表達(dá)上即完成了一次對(duì)于傳統(tǒng)經(jīng)典文本的顛覆性再創(chuàng)作。韓國(guó)人氣偶像劇《豪杰春香》通過(guò)對(duì)韓國(guó)家喻戶曉的傳統(tǒng)故事《春香傳》的改寫(xiě)，在內(nèi)容和形式兩個(gè)層面上創(chuàng)新了表達(dá)方式，消解了傳統(tǒng)敘事中朝鮮人民贊頌女主人公剛強(qiáng)不屈的美好品質(zhì)而抨擊貴族階級(jí)驕奢逸的封建主義腐朽統(tǒng)治這一宏大主題，在將題材簡(jiǎn)化為一女兩男的情感糾葛的同時(shí)完成了電視劇與后現(xiàn)代語(yǔ)境的充分契合。

此外，創(chuàng)作者通過(guò)對(duì)經(jīng)典作品的經(jīng)典細(xì)節(jié)的模仿與拼貼，對(duì)偶像劇在表述形式上進(jìn)行后現(xiàn)念的藝術(shù)加工，完成了經(jīng)典作品的差異化表達(dá)。如臺(tái)灣偶像劇《流星花園》在當(dāng)時(shí)掀起了偶像劇的收視狂潮，盡管該劇是由日本的漫畫(huà)《花樣男子》改編，但改編后的電視劇所獲得的成功遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過(guò)了原有漫畫(huà)所引發(fā)的追捧效果，開(kāi)創(chuàng)了偶像劇中一種王子與灰姑娘式的“經(jīng)典模式”，之后日本、韓國(guó)、中國(guó)的偶像劇都紛紛翻拍和效仿。如《流星花園》中帥氣的四大男主角F4的出場(chǎng)：多輛豪華轎車(chē)在一輛開(kāi)路車(chē)引導(dǎo)下駛?cè)肓诵@，學(xué)校的老師同學(xué)紛紛夾道歡迎，其氣氛絲毫不亞于明星的閃亮登場(chǎng)。這一成功的偶像塑造畫(huà)面在《花樣男子》、《一起來(lái)看流星雨》中都有類似的呈現(xiàn)。

在符號(hào)修辭上，偶像劇借助消費(fèi)奇觀構(gòu)造價(jià)值認(rèn)同，以電視為媒介通過(guò)偶像塑造來(lái)傳播都市文化，引導(dǎo)社會(huì)的消費(fèi)價(jià)值走向。從索緒爾所揭示的“符號(hào)社會(huì)”到鮑德里亞所描繪的“消費(fèi)社會(huì)”，青春偶像劇就是這一語(yǔ)境下的產(chǎn)物。

一方面，偶像劇的偶像呈現(xiàn)不僅是其類型特征所在，更是以此架構(gòu)的消費(fèi)幻境。偶像劇在偶像塑造方面的特質(zhì)不僅鞏固了青少年追逐前沿、緊跟社會(huì)潮流這類受眾群體，而且在轉(zhuǎn)型社會(huì)缺乏偶像的社會(huì)風(fēng)潮中也為其擴(kuò)大受眾基礎(chǔ)奠定了社會(huì)文化根基。偶像在偶像劇中是最具傳播價(jià)值的符號(hào)之一，“偶像”的能指即指劇中的主要角色形象，而其所指則指對(duì)該人物自內(nèi)而外全方位的闡釋，比如內(nèi)涵修養(yǎng)、儀表妝容等，這種表意形式成為偶像劇奇觀建構(gòu)的基礎(chǔ)和受眾訴求表達(dá)的最佳方式。韓劇的盛行在很大程度上得益于偶像符號(hào)意指的最大化拓展，它為整個(gè)影視奇觀的建構(gòu)奠定了絕佳的消費(fèi)根基。以《浪漫滿屋》為例，劇中偶像主要有女主角宋慧喬和男主角Rain，電視劇通過(guò)服裝、化妝、發(fā)飾等等一系列人物外形符號(hào)塑造了兩個(gè)時(shí)尚、俊美卻又不失現(xiàn)實(shí)傳統(tǒng)的偶像，讓觀眾在接納人物的同時(shí)不自覺(jué)地陷入了影視幻境，并在潛意識(shí)中試圖通過(guò)對(duì)劇中偶像人物的模仿來(lái)重塑自我的生存環(huán)境。

另一方面，如果說(shuō)以上所述的偶像符號(hào)的建構(gòu)和偶像奢侈生活的營(yíng)造直接誘導(dǎo)受眾對(duì)影視幻境中消費(fèi)奇觀的追逐的話，那么在偶像劇中通過(guò)影視符號(hào)傳遞的都市文化則以隱喻的方式完成了受眾對(duì)于精英消費(fèi)社會(huì)符號(hào)幻境的價(jià)值認(rèn)同。這里所謂的都市文化，脫胎于現(xiàn)代社會(huì)的城市文化，是在后現(xiàn)代主義的演變之下以思想和技術(shù)的發(fā)展變遷為支撐形成的“超城市”都市形態(tài)。由于這種都市文化與當(dāng)代偶像劇中頻繁出現(xiàn)的隸屬于現(xiàn)代化大都市的相關(guān)畫(huà)面符號(hào)，如高樓大廈、娛樂(lè)會(huì)場(chǎng)、奇裝異服等相契合，因此通過(guò)偶像劇傳播的都市文化就可能形成一個(gè)都市的特定文化表征，亦即所謂的“都市名片”，進(jìn)而對(duì)塑造都市形象、帶動(dòng)都市化相關(guān)產(chǎn)業(yè)的發(fā)展發(fā)揮重要的作用。如《奮斗》中的取景地北京，劇中多次出現(xiàn)的西單、798工業(yè)區(qū)等等一系列都市符號(hào)共同描繪了北京作為一個(gè)國(guó)際化大都市的基本形貌，為都市文化的傳播提供了借鑒。美國(guó)的文化研究學(xué)者戴安娜?克蘭認(rèn)為：“都市文化是階級(jí)文化……它們反映了消費(fèi)這些文化的社會(huì)群體的價(jià)值、態(tài)度和資源。”〔4〕偶像劇在獲取受眾對(duì)都市文化價(jià)值認(rèn)同的同時(shí)，也以這些都市文化的符號(hào)為介質(zhì)隱喻了消費(fèi)都市文化的社會(huì)群體亦即精英群體的價(jià)值、態(tài)度和專屬資源，從而為受眾的都市消費(fèi)創(chuàng)造了絕佳的條件。此外，“對(duì)都市文化的精英形式越來(lái)越影響的商業(yè)公司和都市開(kāi)發(fā)者，并不是無(wú)功利性的……他們直接或間接試圖從他們與這些文化形式的聯(lián)系中牟利”〔4〕。

在傳播特性的把握上，偶像劇以電視為載體完成了符碼表征的消費(fèi)建構(gòu)。迄今為止，廣告、電視和媒體通過(guò)對(duì)社會(huì)的徹底滲透而建構(gòu)的一種新的消費(fèi)類型標(biāo)志著一個(gè)新舊社會(huì)的徹底斷裂，這個(gè)建立在消費(fèi)擬像之上的消費(fèi)社會(huì)正是后現(xiàn)代主義思潮轉(zhuǎn)向的結(jié)果。偶像劇依靠獨(dú)特的藝術(shù)表征所建構(gòu)的幻象之城，在當(dāng)今消費(fèi)社會(huì)形態(tài)下生成的傳播價(jià)值延展了偶像劇都市時(shí)尚元素傳遞的時(shí)空——受眾不僅僅滿足于節(jié)目的觀賞，而且通過(guò)與人的話題交流、現(xiàn)實(shí)消費(fèi)的參照，推動(dòng)著影像幻境與現(xiàn)實(shí)幻境的融合，完成了偶像劇的傳播。受眾試圖通過(guò)現(xiàn)實(shí)中的物質(zhì)消費(fèi)無(wú)限接近偶像劇營(yíng)造的幻境之城，亦即鮑德里亞所說(shuō)的“超真實(shí)”“擬像”世界的形成。《藍(lán)色生死戀》、《浪漫滿屋》等膾炙人口的韓國(guó)偶像劇通過(guò)夢(mèng)幻化的神話敘事、軀體鏡語(yǔ)與類軀體鏡語(yǔ)的反復(fù)呈現(xiàn)，建構(gòu)了一個(gè)頗具崇拜價(jià)值的幻象之城。受眾在接受劇作的都市時(shí)尚化偶像傳播的同時(shí)，將這種審美價(jià)值認(rèn)同傳遞給了消費(fèi)社會(huì)的生產(chǎn)系統(tǒng)，無(wú)論是服裝、化妝品、家私甚至建筑風(fēng)格都趨于影像化，而受眾更是試圖通過(guò)物質(zhì)消費(fèi)參與超真實(shí)社會(huì)的擬造。

三、互文性與受眾身份的重塑

電視的多義性和互文性是生產(chǎn)型受眾誕生的基礎(chǔ)，而生產(chǎn)型受眾的誕生也為電視意義的多維解讀創(chuàng)造了條件。費(fèi)斯克認(rèn)為，“電視多義性”不僅是指“文本建構(gòu)時(shí)必然的龐雜性”，也指“不同社會(huì)地位的觀眾必然引發(fā)出的不同解釋”〔5〕。從“電視多義性”出發(fā)，文本在垂直和水平兩個(gè)向度上構(gòu)成了電視文本的互文性，受眾在以后現(xiàn)代為主的轉(zhuǎn)型風(fēng)潮、媒介素養(yǎng)等因素的制約下呈現(xiàn)出審美意識(shí)的泛化，這兩個(gè)向度的相互作用建構(gòu)了偶像劇開(kāi)放多元的詮釋空間。

文本的互文性是指文本在水平和垂直兩個(gè)層面上相關(guān)因素之間的互相呼應(yīng)，這些因素互相闡發(fā)，互相補(bǔ)充，為文本的解讀提供了或共鳴或間離等多樣化的審美渠道。文本的水平面互文性是通過(guò)類型、角色和內(nèi)容等因素協(xié)作實(shí)現(xiàn)的，相同題材的不同文本之間、不同文本的相似角色之間表意符碼的先在性、模式化影響就是如此。例如日本最具人氣的漫畫(huà)《花樣男子》最早就由臺(tái)灣改編為經(jīng)典偶像劇《流星花園》，隨后日本韓國(guó)先后改編為《花樣少男少女》，地域差異下的三部偶像劇因內(nèi)容的細(xì)微差別建構(gòu)了偶像劇文本的水平互文性——?jiǎng)≈械乃拇竽兄鹘荈4和女主角盡管名字各異，但由于情節(jié)相同而形成了趨同現(xiàn)象，為受眾的影視讀解提供了模式參考。

文本的垂直層面的互文性指的是原始文本與其他不同文本之間的相互指涉關(guān)系，費(fèi)斯克區(qū)分了初級(jí)、次級(jí)、第三級(jí)三種電視文本。初級(jí)文本是電視機(jī)構(gòu)制作完成的原初文本；次級(jí)文本是為初級(jí)文本做宣傳或解讀的副文本，可分為宣傳策劃類（廣告)和媒介類（評(píng)論雜志、報(bào)紙、廣播等）兩種；三級(jí)文本指的是觀眾觀看以后發(fā)生的反應(yīng)或彼此的交流，如口頭交談、觀眾來(lái)信、網(wǎng)絡(luò)評(píng)論等〔6〕。垂直層面的互文性在偶像劇中對(duì)于受眾的解讀起著關(guān)鍵作用，無(wú)論是次級(jí)文本還是三級(jí)文本，都深刻影響著受眾對(duì)于原初文本的解讀。如《一起來(lái)看流星雨》一劇，次級(jí)文本就以“芒果衛(wèi)視自制劇”、“新版《流星花園》”等種種噱頭為該劇的上映積累了充分的收視期待；而在《一起來(lái)看流星雨》上映之后，隨著三級(jí)文本的盛行，受眾對(duì)于該劇的解讀就自然形成了各自的團(tuán)體，他們或褒或貶或中立，完成了多維視域下的解讀過(guò)程。

受眾審美意識(shí)的泛化拓展基于后現(xiàn)代主義思潮下受眾審美意識(shí)的轉(zhuǎn)型，有助于受眾的審美訴求在廣度和深度上交錯(cuò)式地拓展。從利奧塔對(duì)后現(xiàn)代“就是針對(duì)元敘事的懷疑態(tài)度”的定義出發(fā)，后現(xiàn)代主義從根本上講就是一種對(duì)權(quán)威和傳統(tǒng)的顛覆，即反對(duì)單一，主張多元；解構(gòu)中心，解放形式〔7〕。

受眾審美訴求在廣度上的拓展主要表現(xiàn)為受眾審美意識(shí)的普遍覺(jué)醒以及審美活動(dòng)的日常化、大眾化。“審美”作為一項(xiàng)高度藝術(shù)化、精英化的活動(dòng)，曾經(jīng)與大眾保持一定的距離，在技術(shù)發(fā)展支撐下，電視普及所帶來(lái)的受眾電視劇審美意識(shí)的覺(jué)醒日益迫使大眾打破這種距離的間隔；而且偶像劇所特有的世俗化敘事方式也極大地拓寬了受眾的年齡范圍，使劇種脫離了精英階層的觀賞局限。因此，受眾在試圖吸收精英審美方式的同時(shí)，建立了后現(xiàn)代式的觀影態(tài)度，最終形成了偶像劇審美的日常性和大眾化。也就是說(shuō)，多樣化的審美范式不再被精英審美排斥于認(rèn)同范圍之外，任何人都可以對(duì)同一部電視劇做出個(gè)性化的審美品讀。對(duì)偶像劇的審美更加深刻地證明了這一點(diǎn)。同一部《藍(lán)色生死戀》，有人讀出了男女間至死不渝之愛(ài)，有人為女主角的堅(jiān)強(qiáng)執(zhí)著所感動(dòng)，有人則更深入地覺(jué)察到了韓劇隱晦的敘事策略所帶來(lái)的卓越傳播效果；《奮斗》中既有中國(guó)大學(xué)生為了生活而奮斗的拼搏精神，又有錯(cuò)綜復(fù)雜的情感變遷，還有喧囂瑣碎市井生活的真實(shí)寫(xiě)照。

而在深度上，受眾審美訴求的拓展主要表現(xiàn)為受眾在視覺(jué)審美上的開(kāi)掘，從而誕生了“身體審美”之審美范式。偶像劇，顧名思義是將青春靚麗的青少年進(jìn)行偶像塑造，而“偶像”這一符號(hào)在電視語(yǔ)言中是極其具象化的，唯有通過(guò)視覺(jué)語(yǔ)言的多角度詮釋，才能將“偶像”放置于兼具高度與前沿的位置。而這種視覺(jué)語(yǔ)言的“具象化”過(guò)程在偶像劇中突出表現(xiàn)為對(duì)主角身體的呈現(xiàn)，它強(qiáng)化了身體審美在偶像劇視覺(jué)審美范式中的特殊地位。“美學(xué)是作為有關(guān)身體的語(yǔ)言而誕生的。”〔8〕偶像劇的青少年受眾多處于尋求自我價(jià)值和社會(huì)認(rèn)同的人生階段，而劇中青春偶像們的身體呈現(xiàn)恰好為他們提供了一種可供借鑒的、符合社會(huì)審美標(biāo)準(zhǔn)的鏡像模式，使他們習(xí)慣于根據(jù)這一鏡像來(lái)塑造自我的身體以及行為方式，以求更好地融入嬗變的社會(huì)場(chǎng)域。

參考文獻(xiàn)：

〔1〕費(fèi)斯克.解讀電視〔M〕.鄭明椿,譯.臺(tái)北：臺(tái)灣遠(yuǎn)流出版社，1993:63.

〔2〕余乃忠.“后現(xiàn)代”概念的譜系學(xué)懸疑〔J〕.學(xué)術(shù)月刊，2010，（8）:27.

〔3〕讓-弗朗索瓦里奧塔爾.后現(xiàn)代狀態(tài)：關(guān)于知識(shí)的報(bào)告〔M〕.車(chē)槿山,譯.上海：上海三聯(lián)書(shū)店出版社，1997:2.

〔4〕戴安娜?克蘭.文化生產(chǎn)：媒體與都市藝術(shù)〔M〕.趙國(guó)新，譯.南京：譯林出版社，2001：112，113.

〔5〕John Fiske.Television:Polysemy and Popularity〔J〕.Critical Studies in Mass Communication，1986，(3):391.

篇（6）

1、吃了春分飯，一天長(zhǎng)一線。

2、春分種芍藥，到老不開(kāi)花。

3、買(mǎi)種省了錢(qián)，減產(chǎn)后悔晚。

4、春分，日螟封分。

5、春分到清明，棉花干播種。

6、春分降雪春播寒。春分有雨是豐年。

7、春分不上炕，谷雨插不上。

8、春分無(wú)雨到清明。

9、春分有雨家家忙，先種瓜豆后插秧。

10、麥過(guò)春分晝夜忙。

11、兩頭去，中間留，玉米苗子黑油油。

12、春分時(shí)節(jié)，果樹(shù)嫁接。

13、春分大風(fēng)夏至雨。

14、春分南風(fēng)，先雨后旱。

15、春分降雪春播寒。

16、龍生龍，鳳生鳳，好種才有好收成。

17、春分豆苗粒粒伸。

18、春分無(wú)雨莫耕田，秋分無(wú)雨莫種園。

19、春分春分，晝夜平分。

20、春分不種麥，別怨收成壞。

21、春分麥，芒種糜，小滿種谷正合適。

22、有錢(qián)買(mǎi)種，無(wú)錢(qián)買(mǎi)苗。

23、要想出好苗，棉籽粒粒挑。

24、曬棉種，很重要：發(fā)芽勢(shì)，明顯好;發(fā)芽率，能提高。

25、春分西風(fēng)多陰雨。

26、春分有雨家家忙。

27、春分不暖，秋分不涼。

28、春分有雨到清明，清明下雨無(wú)路行。

29、春分分芍藥，到老不開(kāi)花。

30、好種出好苗，早發(fā)早結(jié)桃。

31、春分前冷，春分后暖;春分前暖，春分后冷。

32、種子買(mǎi)得賤，空地一大片。

33、要想莊稼長(zhǎng)得兇，一家一個(gè)漚糞坑。

34、春分春分，百草返青。

35、春分有雨是豐年。

36、麥怕春旱，谷怕急雨。

37、紡好線，用好棉，好種壯苗長(zhǎng)滿田。

38、春分刮大風(fēng)，夏至雨。

39、春季雨豐不歉，冬有大雪多面。

40、春分天暖花漸開(kāi)，馬驢牛羊要懷胎。

41、春分雨不歇，清明前后有好天。

42、春分前后，大麥豌豆。

43、春分不冷清明冷。

44、春分利大風(fēng)，利到四月中。

45、春分天暖花漸開(kāi)，牲畜配種莫懈怠。

46、春分前后怕春霜，一見(jiàn)春霜麥苗傷。

47、花開(kāi)九不盡，果子沒(méi)人問(wèn)。

48、半年的鍋頭當(dāng)年的炕，熏透的煙囪發(fā)苗壯。

49、好種出好苗，好苗多結(jié)桃。

50、春分節(jié)到不能讓，地瓜母子快上炕。

51、種不正，苗不正，結(jié)個(gè)葫蘆歪歪腚。

52、春分無(wú)雨劃耕田。

53、春分麥起身，一刻值千金。

54、春分雨多，有利春播。

春分天氣諺語(yǔ)

1、春分陰雨天，春季雨不歇。

2、春分降雪春播寒。

3、春分前冷，春分后暖;春分前暖，春分后冷。

4、春分刮大風(fēng)，夏至雨。

5、春分有雨到清明，清明下雨無(wú)路行。

6、春分麥起身，一刻值千金。

7、春分刮大風(fēng)，刮到四月中。

8、春分前好布田，春分后好種豆。

9、春分不種麥，別怨收成壞。

10、要想莊稼長(zhǎng)得兇，一家一個(gè)漚糞坑。

11、春分至，把樹(shù)接;園樹(shù)佬，沒(méi)空歇。

12、春分春分，百草返青。

13、要想出好苗，棉籽粒粒挑。

14、春分栽不妥，再栽難成活。

15、春分有雨是豐年。

16、新土填得多，大長(zhǎng)胡蘿卜。

17、驚蟄蛾子春分蠶。

18、吃了春分飯，一天長(zhǎng)一線。

19、曬棉種，很重要：發(fā)芽勢(shì)，明顯好;發(fā)芽率，能提高。

20、春分種芍藥，到老不開(kāi)花。

21、春分麥，芒種糜，小滿種谷正合適。

22、春分南風(fēng)，先雨后旱。

23、春分有雨家家忙，先種瓜豆后插秧。

24、春分分芍藥，到老花不開(kāi);秋分分芍藥，花兒開(kāi)不敗。

25、若要莊稼壯，一年一換炕。

26、春分日，植樹(shù)木。

27、好種出好苗，好苗多結(jié)桃。

28、春分，日螟封分。

29、填平坑灣，先種黍穇。

30、春分到清明，棉花干播種。

31、春分前后，大麥豌豆。

32、春分不上炕，谷雨插不上。

33、有錢(qián)買(mǎi)種，無(wú)錢(qián)買(mǎi)苗。

34、春分早報(bào)西南風(fēng)，臺(tái)風(fēng)蟲(chóng)害有一宗。

35、春分降雪春播寒。春分有雨是豐年。

36、花開(kāi)九不盡，果子沒(méi)人問(wèn)。

37、春分時(shí)節(jié)，果樹(shù)嫁接。

38、追肥澆水跟松耪，三舉配套麥苗壯。

39、春分秋分，晝夜平分。

40、花開(kāi)九不盡，果價(jià)要跑人。

41、春分前后怕春霜，一見(jiàn)春霜麥苗傷。

42、麥到春分晝夜長(zhǎng)。

43、好種出好苗，早發(fā)早結(jié)桃。

44、紡好線，用好棉，好種壯苗長(zhǎng)滿田。

45、春分不暖，秋分不涼。

46、春分早、谷雨遲，清明種薯正當(dāng)時(shí)。

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篇（7）

Overexpression and purification of catalase-peroxidase katG from mycobacterium tuberculosis

【Abstract】Objective　To express and purify the catala se-peroxidase katG gene from mycobacterium tuberculosis. Methods　 Plasmid pET24b containing katG was transferred into com petent Escherichia coli and katG gene was overexpressed by the challenge of isopropylthio-β-D-glactoside(IPTG). The expression of katG protein was on e-step purified by Xpress systemTM. Furthermore， the catalase activity of katG protein was preliminarily detec ted. Results　The recombinant escherichia coli produced katG p rotein in large quantities， accounting for 17.7% of total cell protein. The mole cular mass of katG protein was estimated to be 80 000 by sodium dodecyl sulfate -polyacrylamide gradient gel electrophresis (SDS-PAGE). It was found that imidazole at the concentration of 350 mmol/L could elute the katG protein most efficiently and yield the final preparation at greater than 90% purity. Th e katG protein was preliminarily detected to have the activity of catalase. Conclusions　The stable katG overexpressing recombinant Escherichi a coli can be constructed by the plasmid pET24b containing katG gene. The reco mbinant strain can produce katG protein with catalase activity and the product o f which can be purified into higher activity.

【Key words】Mycobacterium tuberculosis; katG ; Gene expression; Protein purification

異煙肼(INH)是一種最經(jīng)濟(jì)有效的抗癆藥，幾乎所有的抗癆方案中均包括IN H。結(jié)核分支桿菌編碼的katG基因的突變可致結(jié)核分支桿菌對(duì)INH 產(chǎn)生耐藥性［1］。自1992年以來(lái)，對(duì)于katG基因變異或缺失造成分支桿菌對(duì)異煙肼 耐藥的基因水平研究已較為深入［1，2］，有必要在蛋白水平對(duì)耐藥機(jī)制進(jìn)行進(jìn)一步 研究。本研究將含有katG基因的pET24b-katG表達(dá)載體轉(zhuǎn)化埃希大腸桿菌BL21(DE3)菌株 ，獲得穩(wěn)定的高表達(dá)菌株后進(jìn)一步對(duì)表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行了純化，并對(duì)純化產(chǎn)物進(jìn)行了酶活性的初 步檢測(cè)。

材料與方法

一、材料

(一) 質(zhì)粒與菌株　表達(dá)質(zhì)粒pET24b-katG與埃希大腸桿菌BL21(DE3)由復(fù)旦大學(xué)遺傳學(xué)研究 所惠贈(zèng)。

(二) 試劑　XpressTM蛋白純化系統(tǒng)為美國(guó)Invitrogen公司產(chǎn)品；異丙基-β-D硫代 半乳糖苷(IPTG)為華美生物工程公司產(chǎn)品；其他主要生化試劑為美國(guó)Sigma公司產(chǎn)品或國(guó)內(nèi)A R級(jí)產(chǎn)品。

二、方法

(一) 表達(dá)載體的轉(zhuǎn)化與基因產(chǎn)物的表達(dá)　將表達(dá)質(zhì)粒pET24b-katG轉(zhuǎn)化用氯化鈣處理法得 到的感受態(tài)大腸桿菌BL21(DE3)菌株，將菌株涂于含卡那霉素的LB平板上，30°C過(guò)夜培養(yǎng)。 挑取抗卡那霉素的菌株接種于20 ml的LB培養(yǎng)基(加入20%的葡萄糖0.2 ml，濃度50 mg/ml的 卡那霉素40 μl，濃度20 mg/ml的氯霉素34 μl)中，37°C，160 r/min振搖過(guò)夜。取3 ml過(guò) 夜培養(yǎng)物種入100 ml的LB培養(yǎng)基(含20%的葡萄糖1 ml，濃度10 mg/ml的卡那霉素400 μ l， 濃度20 mg/ml的氯霉素170 μl)中，37°C以160 r/min振搖，每20 min測(cè)定1次A60 0值，直至A600值到達(dá)0.4～0.5(勿超過(guò)0.5)。隨后每100 ml LB培養(yǎng)基中 加入1 mol/L IPTG 400 μl，分別在加入IPTG后的第2、3、4、5、6 h收集菌液。將菌液在4 °C下，5 000 g，離心5 min，棄上清。將沉淀物以10 ml緩沖液(50 mmol/L Tris.Cl， pH 8 .0， 2 mmol/L EDTA， 0.1% Triton X-100)重新懸浮，加入溶菌酶(100 μg/ml)。在冰浴中以中等強(qiáng)度超 聲破菌，每次10 s，共3次，破菌后，4°C， 離心5 min，收集上清液備用。

(二) 表達(dá)產(chǎn)物的十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)檢測(cè)　參照文獻(xiàn)［3］ 進(jìn)行。收集IPTG誘導(dǎo)后的菌液10 μl，與 加樣液10 μl混合，100°C水浴，3 min后點(diǎn)樣，25 mA恒流通電進(jìn)行SDS-PAGE。電泳后以 考馬斯亮藍(lán)染色15 min，然后以脫色液脫色觀察結(jié)果。

(三) 表達(dá)產(chǎn)物的純化　采用Xpress TM蛋白純化系統(tǒng)進(jìn)行純化。用無(wú)菌雙蒸水懸 浮樹(shù) 脂純化柱3次。加入7 ml結(jié)合液(20 mmol/L磷酸鈉，500 mmol/L氯化鈉，pH 7.8)，以及經(jīng)IP TG不同時(shí)間誘導(dǎo)后產(chǎn)量最高的破菌液上清5 ml，重新懸浮純化柱。反復(fù)輕搖混合2 min。靜 置10 min，吸棄上清，再加入破菌液上清5 ml重復(fù)以上步驟。以4 ml結(jié)合液重新懸浮純 化柱 ，溫和搖動(dòng)混合2 min，靜置沉淀，吸棄上清，共3次。再以沖洗緩沖液(20 mmol/L磷酸鈉， 500 mmol/L氯化鈉，pH 6.0)洗4次，分別以不同濃度的咪唑洗脫液(50、200、350、500 mmo l/L)各5 ml加入柱中，收集不同洗脫濃度的洗脫液。將洗脫液進(jìn)行SDS-PAGE。將純化后的 蛋白以85%的硫酸胺沉淀，離心后將沉淀物以無(wú)菌雙蒸水溶解，4°C透析過(guò)夜。透析產(chǎn)物加 入甘油(40%)后貯藏于-80°C的環(huán)境下。

(四) 過(guò)氧化氫酶活性測(cè)定　對(duì)破菌液上清進(jìn)行過(guò)氧化氫酶活性的初步測(cè)定。用磷酸鹽(K2 HPO4+KH2PO4，0.1 mol/L)與NaCl(2 mol/L)的緩沖液配制10%的Tween 80溶液，取 5 ml 與30%的雙氧水5 ml混合。分對(duì)照管與katG管，在katG管內(nèi)加入不同容積的含pET-katG表達(dá) 質(zhì)粒的菌株破菌上清(20、40、80、160 μl)，對(duì)照管 則加入含pET空載體的菌株破菌上清，10 min后觀察氣泡產(chǎn)生情況。如產(chǎn)生大量氣泡則提示 酶活性較佳。

結(jié)

果

一、重組katG蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)以及產(chǎn)物的鑒定分析

將含有katG基因的pET24b-katG表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌，在IPTG誘導(dǎo)下表達(dá)，分別對(duì)不同誘 導(dǎo)時(shí)間的表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行SDS-PAGE以及考馬斯亮藍(lán)染色，可在相對(duì)分子質(zhì)量80 000處見(jiàn)一誘 導(dǎo)表達(dá)帶 (圖1)。比較不同誘導(dǎo)時(shí)間的表達(dá)產(chǎn)量可以發(fā)現(xiàn)，經(jīng)誘導(dǎo)2 h后的表達(dá)產(chǎn)量已達(dá)到峰值。在其 后蛋白純化中即可選取該誘導(dǎo)時(shí)間的產(chǎn)物。對(duì)此誘導(dǎo)表達(dá)帶進(jìn)行黑度密度自動(dòng)掃描分析，此 處表達(dá)蛋白量約占總菌體蛋白量的17.7%。

二、重組katG基因表達(dá)產(chǎn)物的純化結(jié)果

采用Xpress TM蛋白純化系統(tǒng)進(jìn)行純化發(fā)現(xiàn)，分別以不同濃度的咪唑洗脫液(50、 200、350、500 mmol/L)洗脫純化柱后，所收集的洗脫液再次進(jìn)行SDS-PAGE分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn) ，以350 mmol/L咪唑洗脫后純化的效率最高，通過(guò)SDS-PAGE黑度密度自動(dòng)掃描分析可以發(fā) 現(xiàn)純化率可達(dá)90%以上。

三、對(duì)katG基因表達(dá)產(chǎn)物的過(guò)氧化氫酶活性測(cè)定結(jié)果

在過(guò)氧化氫反應(yīng)系統(tǒng)中加入不同容積的破菌上清(20、40、80、160、320 μl)，比較氣泡產(chǎn) 生情況，發(fā)現(xiàn)加入含pET-katG表達(dá)質(zhì)粒的菌株破菌上清的各管均有氣泡產(chǎn)生，且均較對(duì)照 管為明顯，而以加入量為160 μl與320 μl的反應(yīng)管產(chǎn)生氣泡最為顯著。提示重組katG表達(dá) 產(chǎn)物具有過(guò)氧化氫酶活性。

討

論

結(jié)核分支桿菌的katG在INH的抗結(jié)核作用機(jī)制中起著關(guān)鍵作用。研究表明INH實(shí)際上是一個(gè) 藥物前體，需經(jīng)結(jié)核分支桿菌過(guò)氧化氫酶-過(guò)氧化物酶活化后 才發(fā)揮抗結(jié)核作用，而katG則由katG基因所編碼［4］。有研究 通過(guò)質(zhì)粒將katG基因轉(zhuǎn)移到INH耐藥菌株胞內(nèi)，可令其對(duì)INH重新恢復(fù)敏感性。而對(duì)結(jié)核分支 桿菌的臨床耐異煙肼菌株進(jìn)行katG基因分析亦發(fā)現(xiàn)該基因的缺失或突變是引起耐藥的主要原 因［5］。然而對(duì)于katG如何活化INH以及katG發(fā)生變異后導(dǎo)致耐藥的 確切機(jī)制仍然 不清，特別是近年來(lái)對(duì)于不同突變位點(diǎn)變異對(duì)藥物敏感性的影響程度頗有爭(zhēng)議［6］ ，因此在蛋白水平研究katG的作用環(huán)節(jié)與耐藥機(jī)制，以及比較不同位點(diǎn) 基因突變對(duì)酶結(jié)構(gòu)與活性的影響等方面進(jìn)行研究可深入了解INH耐藥的發(fā)生機(jī)制，進(jìn)而可 能在蛋白水平找到消除耐藥的途徑。由于結(jié)核分支桿菌生長(zhǎng)較緩，而且具有較強(qiáng)的傳染性， 長(zhǎng)期以來(lái)在提取結(jié)核分支桿菌蛋白進(jìn)行研究的進(jìn)展較緩。本研究通過(guò)基因重組的katG表達(dá)載 體轉(zhuǎn)化到大腸桿菌后產(chǎn)生高表達(dá)的katG蛋白，相對(duì)分子質(zhì)量約為80 000，表達(dá)量可占總菌體 蛋白的17.7%。表明該基因重組的菌株為katG的高表達(dá)菌株，對(duì)表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行初步過(guò)氧化氫 酶活性研究驗(yàn)證了其酶活性。進(jìn)一步對(duì)表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行純化后可提取到純度超過(guò)90%的katG蛋 白。本研究為進(jìn)一步研究katG蛋白、katG對(duì)異煙肼的活化機(jī)制以及為檢測(cè)katG變異耐藥菌株 奠定基礎(chǔ)，并且對(duì)深入闡明INH的耐藥產(chǎn)生機(jī)制與尋求消除耐藥的方法有較大的意義。

參考文獻(xiàn)

1，Rouse DA， Li Z， Bai GH， et al. Characterization of the KatG a nd inhA genes of isoniazid-resistant clinical isolates of Mycobacterium tuber culosis. Antimicrob agents Chemother， 1995， 39:2472-2477.

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3，Sambrook J， Fritsch EF， Maniatis T，著. 分子克隆實(shí)驗(yàn)指南.金冬雁，黎孟楓，譯. 第2版. 北京：科學(xué)出版社，1992.

篇（8）

RIZ1是功能性篩選能與視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤（RB）腫瘤抑制因子相結(jié)合的蛋白質(zhì)時(shí)分離出來(lái)的基因。已發(fā)現(xiàn)由于不同啟動(dòng)子的作用，RIZ1可以表達(dá)兩種蛋白產(chǎn)物，即氨基端含有PR結(jié)構(gòu)域的全長(zhǎng)產(chǎn)物RIZ1（1719個(gè)氨基酸），以及除缺少RIZ1氨基末端200個(gè)氨基酸（包含PR結(jié)構(gòu)域）外其余序列與RIZ1完全相同的RIZ2［1］。研究表明，RIZ1而非RIZ2具有腫瘤抑制特性。一般來(lái)說(shuō)，RIZ1定位于人染色體1p36，為多種不同類型人癌組織所缺失［2］。許多人類腫瘤，如肝癌、結(jié)腸癌、神經(jīng)母細(xì)胞瘤、肺癌、黑素瘤、骨肉瘤的組織中出現(xiàn)RIZ1而非RIZ2表達(dá)沉默［35］。我們初步研究也發(fā)現(xiàn)，人乳腺癌組織中存在RIZ1 mRNA表達(dá)的改變［6］。人癌組織和細(xì)胞株中RIZ1錯(cuò)義失活性突變均出現(xiàn)在PR結(jié)構(gòu)域內(nèi)或其附近［7］。在乳腺癌細(xì)胞系、肝癌細(xì)胞系中由腺病毒介導(dǎo)的RIZ1表達(dá)可以造成細(xì)胞G2M期阻滯和（或）細(xì)胞凋亡［35］。更重要的是基因敲除鼠若無(wú)RIZ1表達(dá)而僅有RIZ2表達(dá)，則易發(fā)生胃癌和B細(xì)胞淋巴瘤［7］。通過(guò)以上研究可以確定PR結(jié)構(gòu)域與腫瘤的發(fā)生有直接聯(lián)系，因此，目前認(rèn)為RIZ1抑制腫瘤的作用與其PR結(jié)構(gòu)域有關(guān)。為了更好地研究RIZ1 PR結(jié)構(gòu)域的功能與結(jié)構(gòu)，我們采用基因工程技術(shù)合成并提純了RIZ1氨基末端含PR結(jié)構(gòu)域的200個(gè)氨基酸的融合蛋白，并初步探討了其體外功能，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

11 材料pRIZ1 RH質(zhì)粒由本研究組保存；原核表達(dá)載體質(zhì)粒pGEX6P3購(gòu)自Amersham Biosciences公司，是一種融合蛋白表達(dá)載體，含一個(gè)可編碼谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶(GST)的讀碼框架，其下游有多克隆位點(diǎn)，插入符合相應(yīng)讀碼框架的外源基因片段，在IPTG的誘導(dǎo)下可表達(dá)出與GST相融合的蛋白質(zhì)；大腸桿菌CM1061菌株（購(gòu)自New England Biolabs）、大腸桿菌BL21（DE3）表達(dá)菌株（購(gòu)自EMD Bioscienses）由本課題研究組保存；Pfu DNA聚合酶等PCR試劑購(gòu)自Stratagene公司；PCR產(chǎn)物純化試劑盒(QIAquick PCR Purification Kit)、大量質(zhì)粒提取試劑盒(QIAGEN Plasmid Maxi Kit)為QIAGEN公司產(chǎn)品；限制性內(nèi)切酶EcoR Ⅰ和Xho Ⅰ購(gòu)自Fermentas公司；T4 DNA連接酶購(gòu)自New England BioLabs公司； Glutathione Agarose吸附柱購(gòu)自Sigma公司；人組蛋白 H3購(gòu)自u(píng)pstate公司；AdenosylLMethionine，S［methyl3H］ 購(gòu)自PerkinElmer公司；BioRad蛋白測(cè)定試劑盒購(gòu)自BIORAD公司。

12 PCR引物的設(shè)計(jì)與合成目的基因?yàn)楹琍R結(jié)構(gòu)區(qū)的PR200基因片段，位于RIZ1全基因序列的第1~600個(gè)核苷酸(nt1600)。通過(guò)GenBank檢索RIZ1的cDNA序列，采用DNA Star軟件設(shè)計(jì)PCR引物，上游引物（GSTPR200P1）序列為：5′ACCGAATTCCATGGAAGTGAGGCTTTTCCCTTC3′，含EcoRⅠ酶切位點(diǎn)及啟始密碼子；下游引物（GSTPR200P2）序列為：5′CTCCTCGAGTCATTATGCAGAG GTGAAATCTGGCT3′，含終止密碼子及XhoⅠ酶切位點(diǎn)。引物由Invitrogen公司合成。

13 目的基因的PCR擴(kuò)增以 pRIZ1 RH質(zhì)粒為模板，以GSTPR200 P1、GSTPR200 P2為引物，采用Pfu DNA聚合酶PCR擴(kuò)增目的基因。陰性對(duì)照以等量去離子水代替模板。其反應(yīng)條件為：95℃ 13min 熱啟動(dòng)；95℃ 30 s，55℃ 30 s，72℃ 60 s，30個(gè)循環(huán)；最后72℃延伸10min。取PCR產(chǎn)物5μl，DNA Marker 1μl，經(jīng)2 % 瓊脂糖凝膠電泳后，在紫外燈下觀察結(jié)果。產(chǎn)物純化后經(jīng)ABI PRISMTM 310 型基因分析儀（PERKIN ELMER） 測(cè)序確認(rèn)。

14 重組載體的構(gòu)建

141 PCR反應(yīng)產(chǎn)物的純化 將以上PCR產(chǎn)物點(diǎn)樣于2 %的瓊脂糖凝膠進(jìn)行電泳，使用PCR產(chǎn)物純化試劑盒純化回收，用20μl去離子水溶解，取1μl在2 %瓊脂糖凝膠電泳上檢查，純化成功后－20℃貯存。

142 載體pGEX6P3的制備 將原核表達(dá)載體pGEX6P3轉(zhuǎn)入大腸桿菌CM1061菌株。挑取單個(gè)菌落培養(yǎng)，用質(zhì)粒提取試劑盒大量提取質(zhì)粒DNA，溶解于50μl的去離子水中。－20℃貯存。

143 PR200－pGEX6P3原核重組表達(dá)載體的構(gòu)建 將純化后的PCR 產(chǎn)物和pGEX6P3表達(dá)載體同時(shí)分別用核酸內(nèi)切酶EcoRⅠ與XhoⅠ雙酶切， 并分別用PCR產(chǎn)物純化試劑盒純化，氯仿抽提法回收。在T4 DNA連接酶作用下，連接含PR 基因片段與表達(dá)載體獲得了PR200－pGEX6P3重組質(zhì)粒（5 498 bp）。

15 表達(dá)重組蛋白陽(yáng)性克隆的檢測(cè)與鑒定用PR200－pGEX6P3重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21（DE3）表達(dá)菌株， 涂布含100mg?L-1 AMP 的LB瓊脂平板，37℃恒溫培養(yǎng)過(guò)夜，平板上長(zhǎng)出較好菌落。挑取陽(yáng)性菌落接種在10ml含青霉素抗性的LB 試管中，37℃劇烈振蕩培養(yǎng)過(guò)夜。次日按1∶60的比例接種過(guò)夜，培養(yǎng)物于15ml含青霉素抗性的LB 試管中，于37℃劇烈振蕩培養(yǎng)至OD600 nm為05～08，均分該培養(yǎng)物為兩部分，一部分加入異丙基β硫代半乳糖苷(IPTG)至終濃度為1mmol?L-1以誘導(dǎo)GSTPR200表達(dá)，另一部分不加IPTG作對(duì)照，繼續(xù)培養(yǎng)5 h，每隔1h兩部分各取1ml 培養(yǎng)物離心后留沉淀細(xì)胞置-70℃冷凍過(guò)夜。采用十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS PAGE)法，檢測(cè)與鑒定能夠表達(dá)與GST融合的含PR結(jié)構(gòu)區(qū)蛋白質(zhì)(GSTPR200融合蛋白)的陽(yáng)性菌落。

16 GSTPR200融合蛋白的提純與質(zhì)譜分析挑取GSTPR200融合蛋白表達(dá)陽(yáng)性菌落接種在10ml含青霉素抗性的LB 試管中，37℃劇烈振蕩培養(yǎng)過(guò)夜，次日按1∶60的比例接種于400ml含青霉素抗性的LB 培養(yǎng)瓶中，于37℃劇烈振蕩培養(yǎng)至OD600 nm 為05～08，加入IPTG至終濃度為1mmol?L-1以誘導(dǎo)GSTPR200表達(dá)，繼續(xù)培養(yǎng)40～50 h。離心收取細(xì)胞，置-70℃冷凍過(guò)夜。次日用5ml PBST重新懸浮細(xì)胞，于4℃溫度下超聲破碎細(xì)胞，利用Glutathione Agarose吸附柱提純GSTPR200融合蛋白。通過(guò)WatersMicromass LCT質(zhì)譜系統(tǒng)（Waters公司）分析該蛋白質(zhì)的分子量。

17 純化GSTPR200融合蛋白的組蛋白甲基化轉(zhuǎn)移酶(HMT)活性測(cè)定

采用BioRad蛋白測(cè)定試劑盒檢測(cè)純化的GSTPR200融合蛋白濃度后，按組蛋白HMT測(cè)定法分析該蛋白質(zhì)的活性［8］。反應(yīng)體系如下：總?cè)莘e為40μl，含20mmol?L-1 TrisHCl （pH 80），02 mol?L-1 NaCl，04 mmol?L-1 EDTA，1 mmol?L-1 DTT，4 μg 純化的GSTPR200融合蛋白或GST蛋白（陰性對(duì)照），5μg組蛋白H3，3μl （165μCi）AdenosylLMethionine，S［methyl3H］。 各反應(yīng)混合物于37℃孵育10～20 h 后，分別取5μl（各設(shè)3個(gè)測(cè)定樣品，共取15μl）反應(yīng)物在P81上點(diǎn)樣、沖洗、晾干，采用LS 6000IC型液閃儀（BECKMAN公司）測(cè)定每分鐘脈沖數(shù)（CPM）以說(shuō)明蛋白質(zhì)HMT活性度。

2 結(jié)果

21 PCR擴(kuò)增的目的基因PCR擴(kuò)增產(chǎn)物長(zhǎng)度為625 bp，其中目的基因?yàn)?00 bp，引入擴(kuò)增產(chǎn)物兩端的限制性內(nèi)切酶識(shí)別位點(diǎn)序列、啟始密碼子與終止密碼子識(shí)別位點(diǎn)序列及保護(hù)堿基長(zhǎng)25 bp。同DNA相對(duì)分子質(zhì)量參照物相比，PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的大小與預(yù)測(cè)的結(jié)果一致（圖1）。

圖1 PCR 擴(kuò)增PR200的結(jié)果(2 %瓊脂糖電泳)（略）

Fig 1 Amplification of PR200 with PCR (2 % agarose gel)

1 DNA ladder；2 Negative control；3 PCR product

22 檢出的表達(dá)重組蛋白陽(yáng)性克隆經(jīng)SDSPAGE蛋白電泳，考馬斯亮藍(lán)R250染色觀察，包含重組質(zhì)粒的誘導(dǎo)菌在相對(duì)分子質(zhì)量47 000位置出現(xiàn)一蛋白條帶，而未誘導(dǎo)的重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化菌在相應(yīng)位置的蛋白條帶要弱得多；含質(zhì)粒pGEX6P3的誘導(dǎo)菌在相對(duì)分子質(zhì)量27 000位置出現(xiàn)一條帶。目的基因表達(dá)的多肽相對(duì)分子質(zhì)量為19700，與融合蛋白共同表達(dá)相對(duì)分子質(zhì)量約為47 000，與理論估計(jì)值相一致。見(jiàn)圖2。

圖2 IPTG誘導(dǎo)轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21（DE3）菌株表達(dá)的SDSPAGE 結(jié)果（略）

Fig 2 SDS PAGE showing the IPTGinduced expression of the transformed Ecoli BL21（DE3）cells

1標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)；2未誘導(dǎo)的轉(zhuǎn)化pGEX6P3的BL21細(xì)胞；3誘導(dǎo)后的轉(zhuǎn)化pGEX6P3的BL21細(xì)胞；4、6、8分別為未誘導(dǎo)的三個(gè)菌落的轉(zhuǎn)化PR200－pGEX6P3 BL21細(xì)胞；5、7、9分別為誘導(dǎo)后的三個(gè)菌落的轉(zhuǎn)化PR200－pGEX6P3 BL21細(xì)胞。 每泳道加樣量約15μg， 12 % 膠。

1 Standard proteins; 2 Uninduced BL21 cells of pGEX6P3 transformed clone; 3 Induced BL21 cells of pGEX6P3 transformed clone; 4，6，8 Uninduced PR200pGEX6P3 transformed BL21 cells of three clones，respectively; 5，7，9 Induced PR200pGEX6P3 transformed BL21 cells of three clones， respectively 15μg per lane， 12 % gel

23 GSTPR200融合蛋白的純化與質(zhì)譜分析通過(guò)Glutathione Agarose吸附柱提純的GSTPR200融合蛋白經(jīng)SDSPAGE蛋白電泳，考馬斯亮藍(lán)R250染色，在相對(duì)分子質(zhì)量47 000位置呈現(xiàn)單一的蛋白條帶（圖3）。質(zhì)譜分析可見(jiàn)46980 處出現(xiàn)單一峰，進(jìn)一步明確了該純化融合蛋白質(zhì)與預(yù)期的分子質(zhì)量一致（圖4）。

圖3 GSTPR200融合蛋白純化的SDSPAGE 結(jié)果（略）

Fig 3 SDSPAGE showing the purification of GSTPR200

1：標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)；2：誘導(dǎo)后細(xì)胞破碎液；3：通過(guò)柱子后的細(xì)胞破碎液；4：洗柱液； 5，6：蛋白洗脫液。 每泳道加樣量約15μg， 12 % 膠。

1 Standard proteins；2 Induced lysate；3 Through flow；4 Washing flow；5，6 Elutions 15μg per lane， 12 % gel

圖4 純化GSTPR200融合蛋白質(zhì)譜分析結(jié)果（略）

Fig4 Mass spectrometry analysis of the purified GSTPR200

24 GSTPR200融合蛋白對(duì)組蛋白甲基化作用采用HMT測(cè)定法可見(jiàn)，GSTPR200融合蛋白組CPM（孵育1、2 h后的3個(gè)樣本CPM均值分別為817±58、1192±83）明顯高于對(duì)照組（GST蛋白質(zhì)組，分別為135±12、184±21）， 兩者差異具有高度顯著性（P

3 討論

PR結(jié)構(gòu)域是腫瘤抑制因子RIZ1的功能區(qū)域，本研究為了原核表達(dá)與純化含該結(jié)構(gòu)域的融合蛋白質(zhì)（GSTPR200融合蛋白），選用了pGEX6P3載體。該載體具有GST 融合特征，可利用此標(biāo)簽進(jìn)行純化。采用大腸桿菌BL21（DE3）表達(dá)菌的優(yōu)點(diǎn)在于該菌T7 RNA聚合酶基因可受IPTG誘導(dǎo)表達(dá)，而且該菌沒(méi)有膜結(jié)合性蛋白分解酶活性，可抑制表達(dá)的融合蛋白質(zhì)分解。本研究通過(guò)將重組載體PR200－pGEX6P3轉(zhuǎn)入BL21（DE3）表達(dá)菌，成功地構(gòu)建了GSTPR200融合蛋白的原核表達(dá)系統(tǒng)，并提純了該融合蛋白質(zhì)。研究發(fā)現(xiàn)PR結(jié)域能夠使組蛋白H3中的第9賴氨酸甲基化，而人癌組織因PR結(jié)構(gòu)域基因突變?cè)斐蒖IZ1甲基轉(zhuǎn)移酶活性降低［89］。本研究為了了解所獲得的GSTPR200融合蛋白是否具有甲基化活性，采用HMT測(cè)定法對(duì)提純的融合蛋白質(zhì)進(jìn)行了檢測(cè)。由于組蛋白H3與甲基在HMT的作用下可形成甲基化組蛋白H3，根據(jù)這一原理以3H標(biāo)記甲基（［3H］methyl），將其與組蛋白H3及受檢測(cè)的蛋白一起反應(yīng)，通過(guò)測(cè)定CPM可反映形成的甲基化組蛋白H3的量，以說(shuō)明該蛋白的HMT活性。本研究中純化的GSTPR200融合蛋白組CPM比對(duì)照組（GST蛋白質(zhì)組）明顯增高，表明得到的融合蛋白質(zhì)中PR部分具有HMT活性。本研究純化蛋白的大量獲取為進(jìn)一步研究RIZ1 PR區(qū)域的結(jié)構(gòu)與功能奠定了基礎(chǔ)。

［參考文獻(xiàn)］

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篇（9）

[關(guān)鍵詞]鈦：微弧氧化：陶瓷氧化膜

[中圖分類號(hào)]R783　[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A　[文章編號(hào)]1008―6455(2007)01－0107―03

純鈦及鈦合金具有良好的生物相容性和機(jī)械加工性能，為目前臨床應(yīng)用最廣泛的口腔種植材料，但鈦基種植體存在生物活性差，與骨結(jié)合強(qiáng)度低，愈合時(shí)間長(zhǎng)及耐磨、耐腐蝕性差，在生理環(huán)境下易造成金屬離子釋放等問(wèn)題，因此為了獲得更優(yōu)的純鈦種植體，需通過(guò)對(duì)鈦進(jìn)行表面改性來(lái)解決。

在眾多的表面改性方法中，微弧氧化是一項(xiàng)在金屬表面原位生長(zhǎng)氧化物陶瓷層的新技術(shù)，它可改變純鈦種植體表面氧化層的厚度、化學(xué)組成、晶相結(jié)構(gòu)、表面微形貌、粗糙度等多種特性，將此法用于純鈦表面改性，可形成粗糙多孔、耐腐蝕、含有不同比例元素的活性氧化層，這種結(jié)構(gòu)有利于提高種植體表面的生物活性，改善其耐腐蝕性，而最新的研究發(fā)現(xiàn)向電解液中加入Ca、P、Si、Mg等成分后所制成的TiO2涂層，可促進(jìn)種植體與骨之間的早期結(jié)合，提高種植體成功率，其中尤以Ca、Mg的效果最為顯著。因此，本實(shí)驗(yàn)擬采用分別含Ca、Mg等元素的不同配方的電解液，利用微弧氧化工藝，對(duì)純鈦表面進(jìn)行生物改性。

1　材料與方法

1．1材料：TA2純鈦(西北有色金屬研究院)：乙酸鈣、乙酸鎂(國(guó)產(chǎn)分析純)：β－甘油磷酸鈉(Sigma公司分析純，美國(guó))。

1．2方法：①試件制備及預(yù)處理：／A2純鈦板經(jīng)線切割加工成(10×10×3)mm3試件，以280＃、500＃、800＃水砂紙逐級(jí)打磨，丙酮、無(wú)水乙醇、蒸餾水超聲清洗后干燥備用：②試件分組：MAO-1組和MAO-2組：③電解液配制：MAO―1組按一定的鈣、磷離子濃度將乙酸鈣、β－GP溶于去離子水中配制成電解液1：MAO-2組按一定的Mg離子濃度將乙酸鎂溶于去離子水中配制成電解液2；④試件微弧氧化處理：以鈦試件為陽(yáng)極，不銹鋼電解槽為陰極，分別在電解液1和電解液2中采用脈沖一直流電源對(duì)鈦試件進(jìn)行微弧氧化處理，并控制電解液溫度在40℃以下，MAO－1組電壓設(shè)定為450V，頻率900Hz，占空比5％，處理時(shí)間5mim MAO-2組電壓設(shè)定為450V，頻率600Hz，占空比10％，處理時(shí)間5min；⑤試件分析：以掃描電鏡(SEM)觀察膜層的表面形貌，X射線衍射(XRD)和X射線能譜(EDX)分析膜層的成分和元素分布。

2　結(jié)果

2．1膜層的表面形貌特點(diǎn)：微弧氧化處理中試件表面可見(jiàn)無(wú)數(shù)個(gè)微小、明亮、游動(dòng)的電弧光，處理后的兩組純鈦試件均表面平整，形成了一層均勻的呈灰白色的陶瓷膜層，經(jīng)渦流測(cè)厚儀測(cè)得MAO-1組膜層厚度約為6μm，MAO-2組膜層厚度約為5μm。表面的掃描電鏡示兩組表面均粗糙多孔，呈現(xiàn)交織網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)(如圖1～2)。

2．2能譜分析：能譜分析見(jiàn)MAO―1組陶瓷膜由Ti，Ca，P，0 4種元素組成(如圖3)；MAO-2組陶瓷膜由Ti、Mg、0 3種元素組成(如圖4)。

2．3 X射線衍射分析：X射線衍射分析表明MAO-1組氧化膜由金紅石型的TiO2、銳鈦礦型TiO2和鈣鈦礦型CaTiO3組成(如圖5)；MAO-2組氧化膜由金紅石型的TiO2、銳鈦礦型TiO2和鎂鈦礦型MgTiO3組成(如圖6)。

3　討論

目前，提高種植體與骨組織結(jié)合的主要方法包括：使種植體表面形貌粗糙，使其具備生物活性，種植體與骨組織間實(shí)現(xiàn)化學(xué)性結(jié)合，種植體在生理環(huán)境下耐腐蝕性等。為了提高這些特性，目前純鈦種植體的表面改性方法很多，按工藝原理主要分：①物理法(粗糙化法、等離子噴涂法、離子注入法等)；②化學(xué)法(處理法、溶膠凝膠法、H2O2，處理法等)：⑧電化學(xué)法(電化學(xué)沉積法、電泳沉積法、微弧氧化法等)。

其中物理法主要是改變純鈦種植體表面形貌和粗糙度，有利于成骨細(xì)胞的附著和骨組織生長(zhǎng)，增加與骨組織間的機(jī)械性結(jié)合，但這種方法不能改變純鈦種植體表面的化學(xué)特性，不具備生物活性，種植體與骨組織間結(jié)合力不強(qiáng)；化學(xué)法則主要是在種植體表面附加生物玻璃、羥基磷灰石等生物活性涂層，利用這些活性涂層來(lái)促進(jìn)種植體與骨組織的早期結(jié)合，但這些涂層大多與種植體間結(jié)合力不強(qiáng)，在機(jī)體生理環(huán)境下耐腐蝕能力差，涂層易分層、降解甚至剝落，長(zhǎng)期效果不佳。因而這些方法還存在一些缺點(diǎn)，不能完全滿足臨床上的需求。

微弧氧化技術(shù)，可很好的解決以上的問(wèn)題，它是近年來(lái)在陽(yáng)極氧化基礎(chǔ)上建立起來(lái)的一項(xiàng)在有色金屬表面原位生長(zhǎng)陶瓷膜的新技術(shù)，它在工作中使用較高電壓，期間發(fā)生了熱化學(xué)、等離子體化學(xué)和電化學(xué)等多種反應(yīng)。微弧氧化時(shí)微弧區(qū)瞬間高燒結(jié)作用可直接把鈦基體金屬氧化燒結(jié)成TiO2陶瓷膜，該層膜粗糙多孔，并且為金屬表面原位生長(zhǎng)，厚度均勻，與基體間結(jié)合牢固，且內(nèi)層極其致密，極大提高了鈦金屬的耐腐蝕耐磨能力。

近年來(lái)研究表明鈦種植體表面粗糙度的增加可以增強(qiáng)磷酸鈣鹽的沉積，提高成骨細(xì)胞造蛋白質(zhì)和攝取鈣離子的能力，多孔粗糙的鈦表面有利于人成骨細(xì)胞的附著、增殖分化和功能表達(dá)，增強(qiáng)種植體與骨組織間結(jié)合力。本實(shí)驗(yàn)掃描電鏡結(jié)果可見(jiàn)不同電解液處理的兩組試件表面均粗糙多孔，呈現(xiàn)交織網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，為將來(lái)骨細(xì)胞附著和骨組織生長(zhǎng)提供了較理想的材料表面形貌。

微弧氧化過(guò)程中電解質(zhì)離子由于參與了微弧區(qū)的物理化學(xué)反應(yīng)，因而也通過(guò)高溫?cái)U(kuò)散到了氧化膜中。因此，通過(guò)調(diào)整電解液成分，可以方便地改變氧化層的化學(xué)組成，使氧化層內(nèi)含有提高骨組織結(jié)合所需的活性元素，從而實(shí)現(xiàn)種植體與骨組織間的化學(xué)性結(jié)合。最新的研究表明當(dāng)TiO2涂層中含有一

定量的Ca、P、Mg成分，鈦種植體與骨組織間結(jié)合會(huì)顯著增加。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)電解液成分的改變和電參數(shù)的控制，使溶液中的Ca、P、Mg元素分別進(jìn)入氧化層中。能譜證實(shí)MAO-1組氧化膜由Ti、Ca、P、0 4種元素組成；MAO-2組氧化膜由Ti、Mg、0 3種元素組成，其中Ti為基體成分，0為氧化過(guò)程中產(chǎn)生，而Ca、P、Mg的大量存在則充分說(shuō)明了微弧氧化中伴隨著沉積過(guò)程，電解液中的離子進(jìn)入并參與了氧化膜的形成，從而在鈦表面形成了含有不同比例元素的活性氧化層，有利于將來(lái)種植體與骨組織間結(jié)合。

XRD分析表明MAO-1組和MAO一2組氧化膜均由金紅石型的TiO2、銳鈦礦型TiO2組成，不同之處在于MAO-1組還含有鈣鈦礦型CaTiO3，而MAO-2組氧化膜還含有鎂鈦礦型MgTiO3。金紅石型和銳鈦礦型TiO2表明氧化膜為致密的陶瓷層結(jié)構(gòu)，并且有研究顯示TiO2的生物相容性高于純鈦，尤其是銳鈦礦型TiO2已被證實(shí)有誘導(dǎo)骨樣磷灰石形成功能，具有一定生物活性。鈣鈦礦型CaTiO3和鎂鈦礦型MgTiO3衍射峰的存在則說(shuō)明在微弧氧化過(guò)程中由于復(fù)雜的化學(xué)反應(yīng)使電解液中的Ca和Mg成分進(jìn)入到氧化層中，并形成了一定的晶相結(jié)構(gòu)，且含量較高。韓國(guó)和瑞典的學(xué)者報(bào)道了含CaTiO3、MgTiO2的TiO2涂層，在模擬體液中可誘導(dǎo)出骨樣磷灰石。因此，可說(shuō)明MAO―1組和MAO-2組氧化膜均具有一定的生物活性。

4　結(jié)論

篇（10）

中圖分類號(hào)：Q786 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：0439-8114（2014）05-1189-02

目前，對(duì)于抗菌肽分子在先天免疫系統(tǒng)中發(fā)揮作用的機(jī)理還不是十分清楚，根據(jù)目前的研究結(jié)果來(lái)看，抗菌肽分子在發(fā)揮抑菌功能的過(guò)程中主要存在兩種模式，一種是直接與細(xì)菌作用將其瓦解，另一種是發(fā)揮蛋白酶活性抑制劑作用來(lái)將細(xì)菌除掉[1]。本研究以凡納對(duì)蝦（Litopenaeus vannamei）重組Lv-SWD蛋白作為研究對(duì)象，通過(guò)蛋白質(zhì)表達(dá)純化以及多克隆抗體的制備，利用細(xì)菌結(jié)合試驗(yàn)來(lái)研究Lv-SWD的細(xì)菌結(jié)合作用，進(jìn)一步豐富無(wú)脊椎動(dòng)物先天免疫系統(tǒng)關(guān)于抗菌肽的基本理論。

1 材料與方法

1.1 材料

表達(dá)菌株是含有pET-28a-Lv-SWD重組子的大腸桿菌表達(dá)菌株。細(xì)菌結(jié)合試驗(yàn)的目標(biāo)菌株分別是2種革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌（金黃色葡萄球菌Staphylococcus aureus、巨大芽孢桿菌Bacillus subtilis）和2種革蘭氏陰性細(xì)菌（綠膿桿菌Pseudomonas aeruginosa和弧菌Vibrio）。制備多克隆抗體需要的家兔為包頭市花苑小動(dòng)物市場(chǎng)購(gòu)買(mǎi)的普通長(zhǎng)耳白兔。

1.2 方法

1.2.1 目的蛋白的表達(dá)純化 對(duì)構(gòu)建的重組Lv-SWD蛋白的重組表達(dá)菌株進(jìn)行IPTG誘導(dǎo)表達(dá)，離心收集菌體進(jìn)行超聲波破碎，并且通過(guò)蛋白質(zhì)電泳試驗(yàn)分析破碎后的上清液與包涵體沉淀中目的蛋白質(zhì)的存在情況。對(duì)于存在于破碎后上清液中的目的蛋白質(zhì)，可以直接利用His-tag鎳柱進(jìn)行親和純化；對(duì)于存在于包涵體中的目的蛋白質(zhì)，要進(jìn)行變性后的透析處理，才能進(jìn)行親和純化[2]。

1.2.2 多克隆抗體的制備與檢測(cè) 將親和純化后的目的重組蛋白質(zhì)進(jìn)行SDS-PAGE試驗(yàn)，檢測(cè)蛋白質(zhì)的純度，利用Bradford法檢測(cè)目的重組蛋白的濃度；之后將目的蛋白質(zhì)作為抗原免疫家兔，進(jìn)行多克隆抗體的制備；家兔免疫共需要4～5次，每次注射間隔7～10 d，并且按照皮下多點(diǎn)注射的原則每次至少注射200 ？滋g重組蛋白。首次免疫將蛋白質(zhì)抗原與弗氏完全佐劑按1∶1（V∶V，下同）進(jìn)行充分混合后注射，第二、第三次注射與弗氏不完全佐劑進(jìn)行充分混合后注射，從第四次免疫開(kāi)始直接注射蛋白質(zhì)溶液[3]。利用Western Blot方法進(jìn)行多克隆抗體的檢測(cè)。

1.2.3 重組蛋白質(zhì)的細(xì)菌結(jié)合試驗(yàn) 將進(jìn)行細(xì)菌結(jié)合試驗(yàn)的目的細(xì)菌菌株進(jìn)行過(guò)夜培養(yǎng)，第二天低速離心收集細(xì)菌菌體，用500 ？滋L 1×PBS緩沖液懸起，加入經(jīng)過(guò)1×PBS緩沖液透析的500 ？滋L目的蛋白質(zhì)溶液（1 mg/mL），室溫條件下?lián)u床孵育1 h；低速離心后用500 ？滋L 1×PBS緩沖液洗滌5次。之后用7% SDS溶液200 ？滋L孵育菌體，沉淀10 min，離心后收集最后的菌體沉淀和7%的SDS洗脫液。將第五次的1×PBS洗脫液、7%的SDS洗脫液、最后的菌體沉淀作為樣品進(jìn)行SDS-PAGE，轉(zhuǎn)膜后利用Western Blot方法檢測(cè)結(jié)合試驗(yàn)的效果，使用的抗體是重組Lv-SWD蛋白制備的多克隆抗體[4]。

2 結(jié)果與分析

2.1 重組Lv-SWD蛋白的純化與多克隆抗體的檢測(cè)結(jié)果

大腸桿菌表達(dá)菌株經(jīng)過(guò)IPTG誘導(dǎo)能夠正確表達(dá)重組Lv-SWD蛋白，理論分子量為12.9 ku，由圖1可見(jiàn)，純化后蛋白條帶的大小接近14.3 ku，說(shuō)明重組蛋白的大小與理論預(yù)測(cè)值相符。Western Blot分析結(jié)果（圖1）表明，重組Lv-SWD蛋白刺激家兔產(chǎn)生的多克隆抗體能夠較好的識(shí)別蛋白質(zhì)本身。

2.2 細(xì)菌結(jié)合試驗(yàn)結(jié)果

細(xì)菌結(jié)合試驗(yàn)結(jié)果（圖2）表明，利用重組Lv-SWD蛋白制備的多克隆抗體識(shí)別醋酸纖維素薄膜后，4種細(xì)菌的菌體沉淀處都有明顯的條帶出現(xiàn)，說(shuō)明巨大芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌以及弧菌都能較好的結(jié)合重組Lv-SWD蛋白。

3 小結(jié)與討論

目前，對(duì)于抗菌肽分子的研究比較深入，尤其是在甲殼類動(dòng)物中的研究成果較多。在中國(guó)明對(duì)蝦、淡水小龍蝦、克氏原鰲蝦、南美白對(duì)蝦、斑節(jié)對(duì)蝦等動(dòng)物中分別發(fā)現(xiàn)了甲殼肽、溶菌酶、抗脂多糖因子、對(duì)蝦素等免疫效應(yīng)分子[5]，這些分子多數(shù)具有一定的先天免疫相關(guān)功能，包括抗菌活性、結(jié)合細(xì)菌活性、蛋白酶活性抑制作用等。通過(guò)研究這些分子的結(jié)構(gòu)特征發(fā)現(xiàn)，一般情況下無(wú)脊椎動(dòng)物先天免疫相關(guān)的抗菌肽分子具有廣泛的多樣性，包括結(jié)構(gòu)多樣性與功能多樣性[6]。在結(jié)構(gòu)方面，抗菌肽分子一般都包括一個(gè)典型的結(jié)構(gòu)域，例如WAP結(jié)構(gòu)域、對(duì)蝦素結(jié)構(gòu)域、溶菌酶結(jié)構(gòu)域，這些結(jié)構(gòu)域的最重要特點(diǎn)就是具有成對(duì)出現(xiàn)的半胱氨酸殘基，數(shù)目一般在8個(gè)以上[7]。

為了進(jìn)一步研究抗菌肽分子的結(jié)構(gòu)與功能之間的聯(lián)系，本研究選擇了凡納對(duì)蝦的SWD分子進(jìn)行了系統(tǒng)研究。凡納對(duì)蝦的SWD分子中存在一個(gè)單獨(dú)的WAP結(jié)構(gòu)域，這個(gè)結(jié)構(gòu)域主要由8個(gè)半胱氨酸殘基組成。通過(guò)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)發(fā)現(xiàn)，這8個(gè)半胱氨酸殘基可以形成4對(duì)二硫鍵，本研究在整個(gè)分子中形成一個(gè)球狀的實(shí)體結(jié)構(gòu)和一個(gè)疏水的空穴。通過(guò)大腸桿菌原核表達(dá)，利用重組蛋白作為抗原，制備了多克隆抗體。從而對(duì)分子的細(xì)菌結(jié)合功能進(jìn)行了研究，結(jié)合此前進(jìn)行的蛋白酶活性抑制試驗(yàn)，筆者發(fā)現(xiàn)重組的Lv-SWD蛋白具有抑制分泌型蛋白酶活性的作用，也存在直接結(jié)合細(xì)菌的功能，因此，推測(cè)在先天免疫系統(tǒng)中，Lv-SWD蛋白是一個(gè)重要的免疫效應(yīng)分子，在對(duì)抗細(xì)菌的入侵過(guò)程中應(yīng)該發(fā)揮著重要的功能。

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篇（11）

腦卒中后抑郁(post-stroke depression,PSD)是指腦卒中后出現(xiàn)的以情緒低落、興趣減退、失眠多夢(mèng)等為主要臨床表現(xiàn)的一種疾病,該病的患病率占腦卒中患者的25%-79%。作為心理性應(yīng)激源,抑郁情緒通過(guò)作用于下丘腦―垂體―腎上腺軸,影響機(jī)體內(nèi)腺體功能,產(chǎn)生相應(yīng)內(nèi)分泌改變。本研究通過(guò)檢測(cè)PSD患者漢密爾頓抑郁量表及血清皮質(zhì)醇(eortisol,Corl水平,探討智三針結(jié)合五行音樂(lè)對(duì)PSD患者神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)的影響。

1　臨床資料

1.1　一般資料本研究共篩選出60名符合納入標(biāo)準(zhǔn)的PSD患者,來(lái)源于廣東省第二中醫(yī)院康復(fù)科2008年3月至2010年5月間住院病例。在獲取知情同意后,按照就診順序編號(hào),查閱SAS8.0軟件產(chǎn)生的隨機(jī)數(shù)字表,分配到對(duì)照組和治療組。其中對(duì)照組29例,男16例,女13例,年齡42-78歲,平均年齡62.5,病程3-14個(gè)月,平均7.3月。治療組31例,男19例,女12例,年齡40-81歲,平均年齡64.1,病程2-16個(gè)月,平均7.9月。經(jīng)t檢驗(yàn),兩組患者年齡、性別、病程方面沒(méi)有顯著性差異。

1.2　納入標(biāo)準(zhǔn)及排除標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1　納入標(biāo)準(zhǔn):f1)符合CCMD-3抑郁癥的診斷標(biāo)準(zhǔn);(2)診斷工具采用漢密爾頓抑郁量表[3](HAMD)24項(xiàng)計(jì)分,總分20分為輕,中度抑郁,>35分為嚴(yán)重抑郁;(3)愿意受試并能合作的患者,均可納入。

1.2.2　排除標(biāo)準(zhǔn):(1)器質(zhì)性精神障礙或精神活性物質(zhì)和非成癮物質(zhì)所致抑郁,重度抑郁癥有嚴(yán)重自殺傾向者;(2)患者在進(jìn)行測(cè)評(píng)前2周內(nèi)接受過(guò)任何形式抗抑郁治療的;(3)合并有心腦血管、肝、腎和造血系統(tǒng)等嚴(yán)重原發(fā)性疾病者;(4)凡不符合納入標(biāo)準(zhǔn),未按規(guī)定治療。無(wú)法判定療效或資料不全等影響療效者。

2　方法

2.1　治療方法對(duì)照組:口服氟西汀膠囊20mg,每日一次,連續(xù)服用8周。

治療組:接受智三針結(jié)合五行音樂(lè)治療。智三針治療選穴主穴:神庭、本神(雙側(cè)),輔穴:合谷(雙)、太沖(雙)、內(nèi)關(guān)(雙)。操作方法:上主穴,選用環(huán)球牌無(wú)菌針灸針(0.3×40mm),直刺25mm,得氣后不做手法,留針60分鐘。以上輔穴,每日選取一個(gè),器械及操作同上,留針20分鐘。針刺治療連續(xù)治療6天,休息1天,共治療8周。五行音樂(lè)治療采用聆聽(tīng)方式進(jìn)行,每天上午下午定時(shí)收聽(tīng)音響設(shè)備外放音樂(lè)1次,每次30min音量控制在60分貝以下,以患者舒適不覺(jué)刺耳為度。醫(yī)生根據(jù)患者臨床癥狀,運(yùn)用中醫(yī)辨證理論,根據(jù)病情累及的臟腑,分別選用角(肝)、徵(心)、宮(脾)、商(肺)、羽(腎)5套治療音樂(lè)進(jìn)行聆聽(tīng),五行音樂(lè)CD由廣東珠江音像出版社出版,收聽(tīng)前向患者講述音樂(lè)所表達(dá)的思想感情,連續(xù)治療8周。

角調(diào)(肝):歡樂(lè)歌、三六、云慶、行街、中花六板、花三六、四合如意。

微調(diào)(心):花好月圓、平湖秋月、月牙五更、十面埋伏、金蛇狂舞、寒鴉戲水。

宮調(diào)(脾):彩云追月、漁舟唱晚、漢宮秋月、姑蘇行、雨打芭蕉。

商調(diào)(肺):夕陽(yáng)簫鼓、昭君怨、蕉窗夜雨、翠湖春曉、柳青娘。

羽調(diào)(腎):紫竹調(diào)、江河水、到春來(lái)、平沙落雁、木棉花開(kāi)、流水行云。

2.2　觀察指標(biāo)

2.2.1　24項(xiàng)漢密爾頓抑郁量表fHAMD)評(píng)定:在未接受抗抑郁治療前,對(duì)所有人組患者進(jìn)行評(píng)定。工作由2名專人負(fù)責(zé)進(jìn)行,要求其未參與病人的診治工作。治療8周后,對(duì)患者進(jìn)行二次評(píng)定。

2.2.2　血漿皮質(zhì)醇的采集與檢測(cè):治療組和對(duì)照組均于治療前及治療8周后,空腹抽靜脈血5mL置于EDTA抗凝管中,在4℃條件下、13000r/min離心30min,吸取上清液,-70℃條件下保存待測(cè)。血漿皮質(zhì)醇測(cè)定采用雙抗體夾心放射免疫法,由GC-1200R放射免疫計(jì)數(shù)儀(中國(guó)科學(xué)技術(shù)大學(xué)中佳光電儀器公司)檢測(cè),實(shí)驗(yàn)步驟嚴(yán)格按照試劑盒(天津九鼎醫(yī)學(xué)生物工程有限公司)說(shuō)明書(shū)操作。2.3統(tǒng)計(jì)分析方法本文計(jì)量數(shù)據(jù)用(x±s)表示,進(jìn)行正態(tài)分布檢驗(yàn)后,采用SPSSIO.O軟件做t檢驗(yàn)。

3　結(jié)果

3.1　漢密爾頓量表評(píng)定比較治療前兩組患者HAMD評(píng)定差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),具有可比性;治療8周后評(píng)分同治療前比較明顯降低,均有顯著性差異(PO.05)。結(jié)果見(jiàn)表1。

3.2　血漿皮質(zhì)醇水平檢測(cè)比較兩組患者治療前血漿皮質(zhì)醇含量無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05),具有可比性;治療8周后同治療前比較血漿皮質(zhì)醇含量明顯下降,具有顯著性差異(PO.05)。結(jié)果見(jiàn)表2。