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緒論：寫作既是個(gè)人情感的抒發(fā)，也是對(duì)學(xué)術(shù)真理的探索，歡迎閱讀由發(fā)表云整理的11篇親屬擔(dān)保書范文，希望它們能為您的寫作提供參考和啟發(fā)。
在《論語(yǔ)·述而》中有這樣一段對(duì)話：葉公問(wèn)孔子于子路，子路不對(duì)。子曰：“女奚不曰：其為人也，發(fā)憤忘食，樂(lè)以忘憂，不知老之將至云爾。”意思是說(shuō)：葉公向子路打聽孔子，子路沒有回答。孔子說(shuō)：“你為什么不這樣說(shuō)，他這個(gè)人，發(fā)憤用功，連吃飯都忘了，快樂(lè)得把一切憂慮都忘了，連自己快要老了都不知道，如此而已。”
我們知道，孔子的成就涉及政治、經(jīng)濟(jì)、文化、醫(yī)學(xué)、養(yǎng)生學(xué)等諸多方面，這些無(wú)不得益于他發(fā)憤圖強(qiáng)、廢寢忘食、勤用腦、善思考的為學(xué)精神。大腦是人體生命的活動(dòng)中樞，精髓和神明高度匯聚之處，人之視覺、聽覺、嗅覺、感覺、思維記憶力等，都是由于腦的作用，這些都說(shuō)明腦是人體極其重要的器官，是生命要害的所在。大腦具有用進(jìn)廢退的特點(diǎn)，所以腦健則壽長(zhǎng)，腦衰則命短。也就是說(shuō)，愛學(xué)習(xí)，勤用腦是促使大腦保持活力的靈丹妙藥。
在工作、學(xué)習(xí)和生活中，我們不要害怕用腦，因?yàn)槟X的潛力是驚人的，人的一生，只不過(guò)用了腦的20%，還有80%的貯備量。人腦有150億個(gè)神經(jīng)細(xì)胞，一生中也只用了百分之幾，所以只要善于開發(fā)腦，就不怕腦衰老。腦用得越多，大腦內(nèi)各種神經(jīng)細(xì)胞之間的聯(lián)系就越多，形成的條件反射也越多，腦子就更靈活。科學(xué)家經(jīng)常測(cè)試，發(fā)現(xiàn)勤用腦的人，大腦不易疲勞，腦神經(jīng)細(xì)胞保養(yǎng)良好，盡管年齡增長(zhǎng)，卻能避免老年性癡呆。而整天無(wú)所事事、無(wú)所用心的人，不僅智力會(huì)下降，而且大腦容易萎縮和早衰。古人主張“博學(xué)強(qiáng)記”，“博學(xué)”可增強(qiáng)記憶，“強(qiáng)記”又可促進(jìn)“博學(xué)”，二者相輔相成，要想達(dá)到這樣的目的，關(guān)鍵是培養(yǎng)濃厚的學(xué)習(xí)興趣。老年人身體機(jī)能都在退化，大腦也是如此，如果老年人能夠積極有效地參加任何一種需要用腦的娛樂(lè)活動(dòng)，如閱讀、猜謎、下棋、打撲克和做手工藝品等，不僅可以延緩大腦衰老，而且可以預(yù)防老年性癡呆癥的發(fā)生。
但是，還要切記不要過(guò)度用腦，過(guò)度用腦會(huì)加速腦細(xì)胞的死亡。人的腦細(xì)胞以驚人的速度在消耗著，雖然腦細(xì)胞貯備量是很大的，但加速常用腦細(xì)胞的死亡，仍然是導(dǎo)致早衰的一個(gè)重要原因。因?yàn)槿说囊簧兄挥?50億個(gè)腦細(xì)胞，損耗一個(gè)就少了一個(gè)，因此不要過(guò)度用腦。勤用腦與不過(guò)度用腦是辯證統(tǒng)一的，中青年人不能過(guò)度用腦，老年人要保持適度用腦，這是腦養(yǎng)生的總原則。
所以，當(dāng)你工作、學(xué)習(xí)之后，如果感到大腦疲憊，可以用手指梳梳頭，給大腦做做按摩。這樣可使頭部毛細(xì)血管擴(kuò)張，加速頭部血液循環(huán)，營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)可充分供給腦組織，有益于醒神爽腦，加強(qiáng)神經(jīng)中樞的正常活動(dòng)，利于智力提高和全身新陳代謝。梳頭時(shí)不要用力過(guò)量，每次約梳2分鐘左右，梳頭時(shí)用手將整個(gè)頭皮和面部按摩幾下，然后再梳理一遍，這樣效果更佳。
多讀書可益壽
文/夏建國(guó)
古代西漢劉向說(shuō)：“書猶藥也，善讀之可以醫(yī)愚。”意思是說(shuō)，書像藥一樣，讀書、學(xué)習(xí)可以醫(yī)治愚蠢。
如果從醫(yī)學(xué)的角度來(lái)看，讀書也是可以治病養(yǎng)生的。這是因?yàn)椋说慕】涤袃煞矫妫斫】岛托睦斫】担呦噍o相成，互為影響。身體健康和心理健康對(duì)人都很重要。心是內(nèi)因，身是外因，身通過(guò)心而起作用，心常常反作用于身。
zhu gs, he js. j chin integr med. 2009; 7(1): 6569.
received june 18, 2008; accepted july 22, 2008; published online january 15, 2009.
indexed/abstracted in and full text linkout at pubmed. journal title in pubmed: zhong xi yi jie he xue bao.
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doi: 10.3736/jcim20090110open access
effects of ligustrazine injection on high glucoseinduced type ⅰ collagen, matrix metalloproteinase1 and tissue inhibitor of metalloproteinase1 expressions in human peritoneal mesothelial cells in vitro
guisong zhu, jinsong he
department of nephrology, the affiliated drum tower hospital, nanjing university medical school, nanjing, jiangsu province 210008, china
objective: to investigate the effects of ligustrazine injection on type ⅰ collagen, matrix metalloproteinase1 (mmp1) and tissue inhibitor of metalloproteinase1 (timp1) expressions in human peritoneal mesothelial cells (hpmcs) cultured in high glucose conditions.
methods: hpmcs were isolated from human omenta by trypsin digestion method and subcultured. then, the hpmcs were divided into normal control group, high glucose group and high glucose plus low, medium and highdose ligustrazine (10, 20 and 40 mg/l ligustrazine respectively) groups. semiquantitative reverse transcriptionpolymerase chain reaction was used to detect the expressions of type ⅰ collagen, mmp1 and timp1 mrnas in hpmcs. proteins of type ⅰ collagen, mmp1 and timp1 in culture supernatants were measured by enzymelinked immunosorbent assay (elisa). cell protein concentration was measured by trace bicinchoninic acid method to correct the elisa assay results.
results: ligustrazine injection could significantly decrease high glucoseinduced type ⅰ collagen and timp1 expressions in a dosedependent manner both in protein and gene levels (p<0.05, p<0.01). in addition, medium and highdose ligustrazine injection could significantly increase mmp1 expression which was inhibited by high glucose concentrations (p<0.05).
conclusion: ligustrazine injection does not only decrease type ⅰ collagen synthesis, but also promote its degradation by modulating unbalanced mmp1/timp1 expression in hpmcs cultured in high glucose conditions.
keywords: ligustrazine injection; human peritoneal mesothelial cells; high glucose; type ⅰ collagen; matrix metalloproteinase1; tissue inhibitor of metalloproteinase1; in vitro
腹膜纖維化是腹膜透析治療的主要并發(fā)癥，最終導(dǎo)致腹膜功能衰竭，這是腹膜透析患者退出治療的主要原因［1］。腹膜纖維化以細(xì)胞外基質(zhì)（extracellular matrix, ecm）的過(guò)度沉積為特點(diǎn)［2］。研究表明，ecm的過(guò)度沉積是由于ecm合成與降解失衡而引起［3］。ⅰ型膠原是腹膜纖維化中主要的ecm［4］，其降解過(guò)程受基質(zhì)金屬蛋白酶1（matrix metalloproteinase1, mmp1）及其特異性抑制劑金屬蛋白酶組織抑制劑1（tissue inhibitor of metalloproteinase1, timp1）調(diào)控［5］。有研究證實(shí)，高糖能上調(diào)腹膜間皮細(xì)胞（human peritoneal mesothelial cells, hpmcs）ⅰ型膠原和timp1的表達(dá)，降低mmp1活性［3］。本研究通過(guò)觀察川芎嗪注射液對(duì)高糖刺激下hpmcs ⅰ型膠原、mmp1和timp1表達(dá)的影響，探討川芎嗪在防治腹膜纖維化中的作用及其機(jī)制。
1 材料和方法
1.1 試劑和主要儀器 川芎嗪注射液（江蘇蘇中藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司，批準(zhǔn)號(hào)為國(guó)藥準(zhǔn)字h20020630）；50％葡萄糖注射液（江蘇方強(qiáng)制藥廠，批號(hào)為200710111）。磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered solution, pbs）、胎牛血清（fetal calf serum, fcs）、trizol和rpmi1640粉劑等（gibco公司）；胰蛋白酶和瓊脂糖粉等（promega公司）；ⅰ型膠原、mmp1和timp1酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（enzymelinked immunosorbent assay, elisa）試劑盒（adl公司）；二喹啉甲酸（bicinchoninic acid, bca）蛋白含量檢測(cè)試劑盒（南京凱基生物科技公司）；ⅰ型膠原、mmp1、timp1和βactin引物，mmlv第一鏈cdna合成試劑盒和taq酶等（invitrogen公司）；抗細(xì)胞角蛋白抗體、抗細(xì)胞波形蛋白抗體、第ⅷ因子抗體和抗白細(xì)胞cd45抗體（北京中山生物技術(shù)有限公司）。nu2500e二氧化碳培養(yǎng)箱（nuaire公司）；全自動(dòng)酶標(biāo)儀（biobank公司）；生物電泳圖像分析系統(tǒng)（上海復(fù)日科技有限公司）。
1.2 實(shí)驗(yàn)方法
1.2.1 hpmcs的培養(yǎng)與鑒定 取來(lái)自南京大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬鼓樓醫(yī)院普外科擇期腹部手術(shù)患者（排除尿毒癥、腹膜炎）捐獻(xiàn)的大網(wǎng)膜組織，按文獻(xiàn)［3］方法原代培養(yǎng)hpmcs，按1︰3傳代，第3代細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)，每次實(shí)驗(yàn)均由來(lái)自3個(gè)患者的標(biāo)本進(jìn)行3次獨(dú)立實(shí)驗(yàn)。倒置相差顯微鏡觀察hpmcs呈多邊形，似鋪路鵝卵石樣外觀；免疫組化鑒定抗細(xì)胞角蛋白抗體和抗波形蛋白抗體染色陽(yáng)性，抗第ⅷ因子抗體和抗白細(xì)胞cd45抗體染色陰性。
1.2.2 實(shí)驗(yàn)步驟和分組 hpmcs用含1％fcs的rpmi1640培養(yǎng)液同步培養(yǎng)24 h后分為5組（每組設(shè)3個(gè)樣本）：正常組（完全培養(yǎng)液）、高糖對(duì)照組（2.5％葡萄糖）和高糖（2.5％葡萄糖）加低、中、高劑量川芎嗪（10、20和40 mg/l）組。各組完全培養(yǎng)液均為含有15％ fcs的rpmi1640培養(yǎng)液。細(xì)胞置于37 ℃、5％ co2培養(yǎng)箱培養(yǎng)48 h。
1.2.3 elisa法檢測(cè)細(xì)胞上清液中ⅰ型膠原、mmp1和timp1含量 分組干預(yù)48 h后，離心收集上清液，按elisa試劑盒說(shuō)明書檢測(cè)ⅰ型膠原、mmp1和timp1表達(dá)水平。用0.1 mol/l naoh溶解細(xì)胞沉淀，bca蛋白檢測(cè)試劑盒測(cè)定細(xì)胞沉淀中蛋白質(zhì)濃度，用相應(yīng)蛋白質(zhì)濃度結(jié)果校正檢測(cè)結(jié)果。
1.2.4 半定量rtpcr 分組處理同上。采用trizol一步法提取總rna，2 μg總rna進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄合成cdna，50 μl反應(yīng)體系進(jìn)行pcr擴(kuò)增，以βactin作內(nèi)參照（引物序列及反應(yīng)條件見表1）。1.5％瓊脂糖凝膠電泳（110 v，15 min）進(jìn)行pcr產(chǎn)物鑒定，電泳圖像分析儀掃描分析，mrna相對(duì)含量用其pcr產(chǎn)物吸光值（absorance, a）與βactin a值的比值表示。引物及pcr反應(yīng)條件見表1。
1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用x±s表示，采用spss 15.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，組間差異比較采用單因素方差分析，兩組間均數(shù)比較采用lsdt檢驗(yàn)。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。 表1 ⅰ型膠原、mmp1、timp1和βactin引物序列及pcr反應(yīng)條件
2 結(jié) 果
2.1 上清液中ⅰ型膠原、mmp1和timp1蛋白質(zhì)水平 與正常組比較，高糖對(duì)照組上清液中ⅰ型膠原和timp1含量顯著升高（p<0.01），mmp1含量顯著下降（p<0.01）；與高糖對(duì)照組比較，低、中和高劑量川芎嗪組上清液中的ⅰ型膠原和timp1含量顯著降低（p<0.05, p<0.01），且兩者均呈量效關(guān)系，中、高劑量川芎嗪組上清液mmp1含量顯著增加（p<0.01）。見表2。表2 各組上清液中ⅰ型膠原、mmp1和timp1蛋白質(zhì)表達(dá)
2.2 hpmcsⅰ型膠原、mmp1和timp1 mrna的表達(dá) 與正常組比較，高糖對(duì)照組hpmcs ⅰ型膠原/βactin mrna和timp1/βactin mrna分別上升（15.43±0.83）倍和（4.19±0.09）倍（p<0.01），mmp1/βactin mrna下降（86.9±0.44）%（p<0.01）；與高糖對(duì)照組相比，低、中、高劑量川芎嗪組ⅰ型膠原/βactin mrna和timp1/βactin mrna表達(dá)水平均顯著下調(diào)（p<0.05），兩者均呈量效關(guān)系，中、高劑量川芎嗪組mmp1/βactin mrna表達(dá)顯著增加（p<0.05）。見圖1和圖2。
3 討 論
高糖透析液導(dǎo)致ecm過(guò)度沉積是腹膜纖維化的病理基礎(chǔ)［2］，研究表明，高糖不僅增加hpmcsⅰ型膠原的表達(dá)，并且引起ⅰ型膠原降解酶系mmp1/timp1的表達(dá)失衡［3］。我們的研究結(jié)果與之基本相同，此外我們發(fā)現(xiàn)，川芎嗪能顯著對(duì)抗高糖的上述作用。
在生理?xiàng)l件下，hpmcs可以產(chǎn)生一定量的ecm和mmps/timps［3, 6］。mmps是降解ecm的蛋白水解酶系，幾乎能降解全部ecm成分。timps是內(nèi)源性分泌蛋白，作為mmps的特異性抑制因子，其n'端可與相應(yīng)的mmps催化活性中心的鋅離子結(jié)合而抑制其催化活性［7］。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)研究川芎嗪對(duì)hpmcs在高糖刺激下主要ecm ⅰ型膠原及其降解酶系mmp1/timp1分泌及表達(dá)的影響，旨在探討川芎嗪對(duì)hpmcs在高糖環(huán)境下ⅰ型膠原的合成和降解的干預(yù)作用及其機(jī)制。結(jié)果顯示，川芎嗪能顯著降低高糖所致的ⅰ型膠原的過(guò)度合成，同時(shí)顯著下調(diào)timp1的表達(dá)，增加mmp1的表達(dá)，提示川芎嗪亦能通過(guò)調(diào)節(jié)mmp1/timp1的平衡，從而促進(jìn)ⅰ型膠原的降解，減少ecm沉積。由此我們推測(cè)，川芎嗪可能具有預(yù)防或延緩腹膜纖維化的作用。
川芎嗪是中藥川芎的有效成分之一，屬酰胺類生物堿，具有活血化瘀的功效。藥理實(shí)驗(yàn)證明，川芎嗪具有擴(kuò)張血管、改善微循環(huán)、調(diào)節(jié)免疫和鈣離子拮抗的作用［8］。目前川芎嗪抑制ⅰ型膠原、timp1和增加mmp1表達(dá)的機(jī)制尚不清楚。以往的研究發(fā)現(xiàn)這可能與抑制轉(zhuǎn)化細(xì)胞生長(zhǎng)因子β1（transforming growth factorβ1, tgfβ1）表達(dá)有關(guān)［9, 10］。tgfβ1是重要的致纖維化細(xì)胞因子，參與了腹膜纖維化的病理過(guò)程［2］。tgfβ1可增加ⅰ型膠原的合成，并且抑制mmps的活性而激活timps，使ⅰ型膠原降解減少［3, 11］。有研究報(bào)道，川芎嗪能降低多種細(xì)胞如心肌細(xì)胞、肝細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞的膠原合成和timp1表達(dá)，而增加mmp1的分泌和表達(dá)，進(jìn)一步的研究發(fā)現(xiàn)這可能是通過(guò)抑制tgfβ/smads信號(hào)傳導(dǎo)通路繼而抑制tgfβ1表達(dá)的結(jié)果［9, 10, 12］。我們前期研究證實(shí)，川芎嗪能下調(diào)高糖致hpmcs tgfβ1的表達(dá)（文章待發(fā)表）。因此我們推測(cè)，川芎嗪抑制tgfβ1的表達(dá)可能是其抑制hpmcs ⅰ型膠原合成和調(diào)整mmp1/timp1表達(dá)平衡的機(jī)制之一，其具體機(jī)制將是我們下一步要研究的內(nèi)容。
綜上所述，川芎嗪能抑制高糖致hpmcs ⅰ型膠原的過(guò)度合成，并且通過(guò)調(diào)節(jié)mmp1/timp1的平衡，促進(jìn)ⅰ型膠原降解，從而減少ecm的沉積，防止腹膜纖維化的發(fā)生和發(fā)展。因此，川芎嗪可能具有預(yù)防或延緩腹膜纖維化的作用，這對(duì)腹膜纖維化的機(jī)制及其防治的研究有一定借鑒和應(yīng)用價(jià)值。
【參考文獻(xiàn)】
1 plum j, hermann s, fusshller a, schoenicke g, donner a, rhrborn a, grabensee b. peritoneal sclerosis in peritoneal dialysis patients related to dialysis settings and peritoneal transport properties. kidney int suppl. 2001; 78: s42s47.
2 yung s, liu zh, lai kn, li ls, chan tm. emodin ameliorates glucoseinduced morphologic abnormalities and synthesis of transforming growth factor beta1 and fibronectin by human peritoneal mesothelial cells. perit dial int. 2001; 21(suppl 3): s41s47.
3 kim jj, li jj, kim ks, kwak sj, jung ds, ryu dr, yoo th, choi hy, han sh, kim hj, yoon sy, han ds, kang sw. high glucose decreases collagenase expression and increases timp expression in cultured human peritoneal mesothelial cells. nephrol dial transplant. 2008; 23(2): 534541.
4 perfumo f, altieri p, degl'innocenti ml, ghiggeri gm, caridi g, trivelli a, gusmano r. effects of peritoneal effluents on mesothelial cells in culture: cell proliferation and extracellular matrix regulation. nephrol dial transplant. 1996; 11(9): 18031809.
5 wang yd, yan py. expression of matrix metalloproteinase1 and tissue inhibitor of metalloproteinase1 in ulcerative colitis. world j gastroenterol. 2006; 12(37): 60506053.
6 visse r, nagase h. matrix metalloproteinases and tissue inhibitors of metalloproteinases: structure, function, and biochemistry. circ res. 2003; 92(8): 827839.
7 fujisaki k, tanabe n, suzuki n, mitsui n, oka h, ito k, maeno m. the effect of il1alpha on the expression of matrix metalloproteinases, plasminogen activators, and their inhibitors in osteoblastic ros 17/2.8 cells. life sci. 2006; 78(17): 19751982.
8 huang y, chen sq, zhang g, chen rh. effect of tetromethylpyrazine and aminoguanidine on expression of vascular endothelial growth factor in kidney of diabetic rats. j chin integr med. 2004; 2(1): 3941. chinese with abstract in english.
黃焱, 陳少?gòu)?qiáng), 張更, 陳瑞華. 川芎嗪聯(lián)合氨基胍對(duì)糖尿病大鼠腎臟血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子表達(dá)的影響. 中西醫(yī)結(jié)合學(xué)報(bào). 2004; 2(1): 3941.
9 lin yz, xu cx, deng yl, chen l, huang h, du j. effects of tetramethylpyrazine on fibrosis of atrial tissue and atrial fibrillation in a canine model of congestive heart failure induced by ventricular tachypacing. j chin integr med. 2006; 4(1): 3538. chinese with abstract in english.
林亞洲, 許春萱, 鄧玉蓮, 陳林, 黃海, 杜建. 川芎嗪對(duì)心室快速起搏心力衰竭實(shí)驗(yàn)犬心房顫動(dòng)及心房纖維化的影響. 中西醫(yī)結(jié)合學(xué)報(bào). 2006; 4(1): 3538.
10 hua hy, li yy, ge sw. study of tetramethylpyrazine in treatment on liver fibrosis and mechanism in rats. zhong yao yao li yu lin chuang. 2007; 23(5): 6062. chinese with abstract in english.
第六條擔(dān)保人提供擔(dān)保的期限為自員工（被擔(dān)保人）報(bào)到入職之日起至員工（被擔(dān)保人）與公司解除勞動(dòng)關(guān)系之后六個(gè)月內(nèi)，因特殊情況需要延長(zhǎng)擔(dān)保期限的，擔(dān)保期限另行約定。
第七條擔(dān)保人擔(dān)保額不低于該員工月工資總額的3倍。
二．總則
第一條為加強(qiáng)公司的內(nèi)部管理，保證員工遵守公司各項(xiàng)規(guī)章制度以及法律法規(guī)，防范因特殊崗位員工的失職或違規(guī)給公司帶來(lái)的風(fēng)險(xiǎn)，維護(hù)公司權(quán)益，特制定本制度。
第二條公司物流管理部和財(cái)務(wù)部員工，無(wú)論何種用工形式，在接到聘用通知后應(yīng)馬上著手辦理《擔(dān)保書》（見附件）一式三份（公司、擔(dān)保人、被擔(dān)保人各執(zhí)一份），并在報(bào)到之前交公司核實(shí)后方給予辦理入職手續(xù)。
第三條公司從事銷售工作的員工無(wú)論何種用工形式，從試用期開始，必須交納不少于3萬(wàn)元的風(fēng)險(xiǎn)保證金。
第四條人力資源部全面負(fù)責(zé)公司員工擔(dān)保的管理工作。
三.擔(dān)保資格
第八條擔(dān)保人可以是員工（被擔(dān)保人）的朋友、近親屬，也可是本公司在職員工（但不可互相擔(dān)保），同時(shí)必須符合以下條件：
1.擔(dān)保人必須是完全民事行為能力人。
2.具備鄭州市戶籍，并且是電力系統(tǒng)員工。
3.在鄭州市有住所并有正當(dāng)職業(yè)及固定經(jīng)濟(jì)收入來(lái)源（由擔(dān)保人工作單位提供加蓋其單位公章的收入證明）。
四.擔(dān)保核對(duì)和變更
第九條到公司應(yīng)聘特殊崗位員工在報(bào)到入職前須將其擔(dān)保人的詳細(xì)資料，提交至人力資源部審核。由人力資源部負(fù)責(zé)與擔(dān)保人簽署擔(dān)保書，擔(dān)保人還須提供身份證原件供核驗(yàn)及復(fù)印存檔。
第十條公司人力資源部對(duì)特殊崗位員工每年核對(duì)擔(dān)保一次，必要時(shí)每半年核對(duì)擔(dān)保一次或隨時(shí)核對(duì)擔(dān)保。核對(duì)方式包括：電話問(wèn)詢、家訪等。
第十一條擔(dān)保人工作單位、住址、電話或相關(guān)信息有變更時(shí)，員工應(yīng)馬上通知人力資源部更新?lián)Ｈ速Y料。
第十二條如擔(dān)保人因故喪失擔(dān)保資格，員工應(yīng)立即自動(dòng)按規(guī)定另行更換擔(dān)保。
第十三條發(fā)生以上第十一條、第十二條情況而員工不予呈報(bào)事后被察知者，視情節(jié)輕重予以處罰。
第十四條員工因故須更換擔(dān)保人者，應(yīng)告知理由并另?yè)駬?dān)保人，重新辦理?yè)?dān)保手續(xù)，核準(zhǔn)后發(fā)還原擔(dān)保書。
購(gòu)車方(以下簡(jiǎn)稱乙方)：
甲方雙方本著自愿的原則，經(jīng)協(xié)商同意簽訂本協(xié)議，以資雙方共同遵守執(zhí)行。
第一條甲方根據(jù)乙方的要求，同意將＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿汽車壹輛；發(fā)動(dòng)機(jī)號(hào)＿＿＿＿＿＿；車架號(hào)＿＿＿＿＿＿，計(jì)價(jià)人民幣＿＿拾＿＿萬(wàn)＿＿千＿＿百＿＿拾＿＿元(￥＿＿＿＿)，銷售給乙方。
第二條因資金短缺原因，乙方需向銀行申請(qǐng)汽車消費(fèi)信貸專項(xiàng)資金貸款，并請(qǐng)求甲方為其貸款的擔(dān)保人。
第三條乙方在簽訂此合同時(shí)，首先在銀行開立個(gè)人存款賬戶、申辦信用卡，并安不低于所購(gòu)車輛總價(jià)的＿＿%的款項(xiàng)，計(jì)入民幣＿＿＿＿萬(wàn)元存入該賬戶。剩余款項(xiàng)＿＿＿＿元向銀行申請(qǐng)貸款，并按期向該銀行歸還貸款本息。
第四條作為乙方貸款擔(dān)保人，甲方接受銀行委托，對(duì)乙方進(jìn)行貸款購(gòu)車的資信審查，乙方必須按甲方要求提供詳實(shí)證明資料配合甲方工作，并在貸款未償清之前，必須在甲方指定的保險(xiǎn)公司辦妥所購(gòu)車輛信用或保證保險(xiǎn)以及貸款銀行為第一受益人的車輛損失險(xiǎn)、第三者責(zé)任險(xiǎn)、車輛資搶險(xiǎn)、不計(jì)免賠險(xiǎn)及其相關(guān)的附加險(xiǎn)。在此前提下，乙方按甲方指定場(chǎng)所對(duì)所購(gòu)車輛進(jìn)行交接驗(yàn)收，并簽署《車輛驗(yàn)收交接單》。
第五條乙方在未付清車款及相關(guān)款項(xiàng)前，同意將所購(gòu)車輛作為欠款的抵押擔(dān)保物，此抵押物在乙方發(fā)生意外且無(wú)力償還時(shí)，按最長(zhǎng)不超過(guò)三折舊比例作價(jià)給甲方。并將購(gòu)車發(fā)票、合各證及車輛購(gòu)置附加費(fèi)憑證交甲方保存，期間不得將所購(gòu)車輛轉(zhuǎn)讓、變賣、出租、重復(fù)抵押或做出其他損害甲方權(quán)益的行為。
第六條在乙方提供停車泊位證明及其他入戶所需證明條件下，甲方可協(xié)助乙方辦理車輛的牌、證、保險(xiǎn)手續(xù)，實(shí)際費(fèi)用由乙方承擔(dān)。
第七條在三保期限內(nèi)，乙方所購(gòu)車輛如出現(xiàn)質(zhì)量問(wèn)題，自行到廠家特約維修服務(wù)中心進(jìn)行交涉處理。此期間，乙方不得以此為借口停止或拖延支付每期應(yīng)向銀行償還的人款。
第八條如乙方發(fā)生下列情況，按本合同第九條規(guī)定處理：
1.乙方逾期還款，乙方經(jīng)甲方二次書面催討，在第二次催討期限截止日仍不還款的(逾期5天后，即發(fā)出書面催討，二次催討間隔為7天，第二次催討期限截止日為文書發(fā)出日第7天)；
2.乙方借口車輛質(zhì)量問(wèn)題，拒不按期償還欠款；
3.發(fā)生乙方財(cái)產(chǎn)被申請(qǐng)執(zhí)行，訴訟保全，被申請(qǐng)破產(chǎn)或其他方面原因致使乙方不能按期還款的。貸款未償清之前，不在指定的保險(xiǎn)公司辦理本合同第四條所指各類車輛保險(xiǎn)；
4.其他情況乙方不能按期向銀行還款；
5.乙方違反本合同第五條的規(guī)定，未經(jīng)甲方同意，擅自將車輛轉(zhuǎn)讓、變賣、抵押。
第九條乙方承諾，不論任何原因發(fā)生第八條的事由之一時(shí)：
1.甲方有權(quán)要求乙方立即償還全部貸款及利息，并承擔(dān)賠償責(zé)任；甲方有權(quán)持合同就乙方未償還的全部欠款，向有管轄權(quán)限的人民法院申請(qǐng)強(qiáng)制執(zhí)行。乙方自愿接受人民法院的強(qiáng)制執(zhí)行。
2.甲方有權(quán)按合同規(guī)定行使抵押權(quán)拍賣變賣乙方所購(gòu)車輛，拍賣所得價(jià)款償還全部債款和其他欠款。如果出售所得的價(jià)值(扣作必要費(fèi)用外)不足償還全部欠款和費(fèi)用總和的，甲方有權(quán)向乙方繼續(xù)追償，如果出售所得超過(guò)欠款和費(fèi)用總和的，甲方應(yīng)將超過(guò)部分的錢款返還給乙方。
3.甲方有權(quán)要求乙方除支付逾期款額的利息外，并按逾期總額的5‰/日計(jì)付滯納金。
第十條在分期還款過(guò)程中，乙方所購(gòu)車輛發(fā)生機(jī)動(dòng)車輛保險(xiǎn)責(zé)任范圍內(nèi)的災(zāi)害事故，致使車輛報(bào)廢、滅失，保險(xiǎn)公司賠款應(yīng)保證首先償還尚欠銀行的貸款及利息部分。
第十一條除車款外，乙方尚須向甲方交納擔(dān)保費(fèi)，金額以借款額為基數(shù)，隨貸款年限一次付(一年1%；二年2%；三年3%)。乙方如提前還清車款，從還清日起，甲方自動(dòng)終止擔(dān)保人義務(wù)。
第十二條乙方配偶或直系親屬，作為共同購(gòu)車人，須就此合同內(nèi)容簽署同意書，作為本合同附件。
第十三條乙方擔(dān)保人自愿為乙方分期付款購(gòu)置汽車擔(dān)保，須就此合同的內(nèi)容簽署擔(dān)保書，作為本合同附件。
第十四條本合同按合同條款履行完畢時(shí)，合同即自行終止。
第十五條本合同需經(jīng)公證處公證后生效。
第十六條本合同一式五份，甲、乙雙方及貸款銀行、保險(xiǎn)公司、公讓處各執(zhí)一份。
附件1：同意書
附件2：擔(dān)保書
供車方：×企業(yè)購(gòu)車方：
法定代表人：法定代表人：
附件1：
同意書
致：×企業(yè)
鑒于＿＿＿＿(購(gòu)車人)與貴單位于＿＿＿年＿＿月＿＿日簽訂的《購(gòu)車合同書》購(gòu)買壹輛＿＿＿＿＿＿型號(hào)汽車一事，本人做為＿＿＿＿＿＿(購(gòu)車人)的配偶(直系親屬)，對(duì)春關(guān)系存續(xù)期間財(cái)產(chǎn)享有共同所有權(quán)，對(duì)債務(wù)亦共同承擔(dān)義務(wù)。為此，特向貴單位確認(rèn)如下：
一、本人同意＿＿＿＿＿(購(gòu)車人)將所購(gòu)汽車低押給貴單位，作為仙款購(gòu)車所欠款的抵押擔(dān)保物。
二、本人愿同購(gòu)車人共同參與對(duì)銀行欠款的償環(huán)，直到對(duì)銀行的欠款本息全中償還完畢。
三、(若共同購(gòu)車人與購(gòu)車人系夫妻關(guān)系)倘若購(gòu)車人與本人解除夫妻關(guān)系，除非法院離婚判決書或調(diào)解書或經(jīng)民政部門辦理的離婚協(xié)議書中專門注明該車輛所有權(quán)和債務(wù)的歸屬為購(gòu)車人，否則不解除本人還款義務(wù)。
四、本人已詳細(xì)閱讀過(guò)了《購(gòu)車合同書》，充分理解合同經(jīng)過(guò)公證后上有強(qiáng)制執(zhí)行效力。我同意放棄權(quán)和抗辯權(quán)。
五、本同意書一經(jīng)本人簽字或蓋章后即對(duì)本人具有法律約束力。
同意人(即購(gòu)車人配偶)＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿(簽字蓋章)
身份證號(hào)：＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿
簽署時(shí)間：＿＿＿＿年＿＿月＿＿日
附件2：
擔(dān)保書
＿＿＿＿＿＿＿＿自愿作為汽車消費(fèi)貸款購(gòu)車人＿＿＿＿＿＿＿＿的擔(dān)保人，承認(rèn)并遵守以下條款：
一、當(dāng)購(gòu)車人未按期償付欠款時(shí)，承擔(dān)連帶擔(dān)保責(zé)任。
二、對(duì)由于購(gòu)車人未按期償付欠款而引起的一切相關(guān)損失及經(jīng)濟(jì)賠償責(zé)任，承擔(dān)連帶擔(dān)保責(zé)任。
Abstract：Objective Regulating telomerase activation is an ideal way to treat cancer . Current studies show that wogonin has the attributes of antioxidation and inhibition on the growth of tumor cells . This study aimed at evaluating the relationship between telomerase activation and apoptosis after wogonin administration in nude mice which implanted human ovarian cancer cells SKOV3. MethodsNude mice with implanted human ovarian cancer cells SKOV3 were randomly pided into five groups， including high dose group ，low dose group ， normal control group ， cisplatin therapy group， and combined therapy group (cisplatin and wogonin) . The expression of hTERT， Bcl-2， Bax and the apoptosis index were detected by immunohistochemistry.Results The results showed that wogonin could significantly suppress the growth of tumor compared with controlled group. The down expression of telomerase activation and the effectiveness was related to the dose of wogonin . With the increase of suppressing on tumor ，the expression of Bcl-2 decrease regularly ， and it showed the opposite tendency of the apoptosis index . While the expression of Bax increased regularly ，and it showed the same tendency with the change of apoptosis expression. ConclusionWogonis can suppress the growth of tumor and regulate telomerase activation. The effectiveness is related to the dose of wogonin ， the effect of wogonin would be better if it is combined with cisplatin in the treatment of tumor . It downregulates the activation of telomerase accompanied with apoptosis of cells ，the possible reason is that it damages the structure of telomerase and switch on apoptosis gene .
Key words：Wogonin;
Tumor of the ovary;
Telomerase； Apoptosis
端粒酶是維持端粒長(zhǎng)度、確保腫瘤細(xì)胞不退出細(xì)胞周期而得以永生化的關(guān)鍵之一。85% 的腫瘤細(xì)胞表達(dá)端粒酶活性，端粒酶的激活與腫瘤增殖密切相關(guān)，因此端粒酶成為治療惡性腫瘤的一個(gè)理想的靶點(diǎn)。近年來(lái)尋找和研究端粒酶抑制劑是國(guó)內(nèi)外研究的一個(gè)熱點(diǎn)。本課題組前期研究漢黃芩素表明在體外它具有誘導(dǎo)卵巢癌細(xì)胞凋亡作用，能抑制端粒酶活性的表達(dá)［1］。本研究通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，觀察漢黃芩素對(duì)腫瘤生長(zhǎng)的抑制作用，并研究其對(duì)移植人卵巢癌SKOV3細(xì)胞裸鼠組織端粒酶蛋白hTERT影響與凋亡的相關(guān)性。
1 材料
1.1 細(xì)胞人卵巢癌SKOV3細(xì)胞由廣西腫瘤防治研究所提供。培養(yǎng)于含10%的小牛血清，100 u/ml青霉素和100 μg/ml鏈霉素的RPMI-1640培養(yǎng)液中，37℃，5%CO2培養(yǎng)箱中孵育培養(yǎng)、傳代。
1.2 藥物漢黃芩素是從黃芩根中分離出的一種單體，分子量為284 kDa，黃色晶體，其化學(xué)性質(zhì)、理化性質(zhì)、光譜數(shù)據(jù)參見文獻(xiàn)［2］。注射用順鉑（凍干型），齊魯制藥有限公司生產(chǎn)。
1.3 裸鼠裸鼠由上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供，4周齡，約20 g左右，雌性，生產(chǎn)許可證SCXK（滬）2004-0005。
2 方法
2.1 動(dòng)物分組及給藥將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的人卵巢癌細(xì)胞SKOV3經(jīng)胰酶消化后，制備成107/ml的細(xì)胞懸液，每只裸鼠腋部皮下接種0.2 ml，約2周后接種原位出現(xiàn)腫瘤，成功率為27/30。選取其中25只裸鼠隨機(jī)分為5組即：漢黃芩素高劑量A組600 mg·kg-1·d-1；低劑量B組300 mg·kg-1·d-1；常規(guī)治療C組腹腔注射順鉑3 mg·kg-1·d-1；聯(lián)合用藥D組同時(shí)用腹腔注射順鉑3 mg·kg-1·d-1和灌胃給藥600 mg·kg-1·d-1；空白對(duì)照E組灌生理鹽水10 ml·kg-1·d-1；采用灌胃給藥開始治療，共用藥10 d。停藥7 d后處死所有裸鼠，取瘤塊并分成約0.1 g/份，福爾馬林固定，石蠟包埋。常規(guī)HE染色。
2.2 檢測(cè)裸鼠組織中hTERT，Bcl-2，Bax蛋白的表達(dá)方法采用抗生素-生物素過(guò)氧化酶復(fù)合物（S-P）免疫組化法。
組織切片0.4 μm， 55℃烤片過(guò)夜，常規(guī)脫蠟，高壓修復(fù)抗原，PBS洗滌3次。3%H2O2孵育，室溫5～10min，H2O2要覆蓋組織，PBS洗滌3次，滴加1:100的1抗，孵育1 h。PBS洗滌3次。滴加生物素標(biāo)記的第2抗體，37℃，10～15min， PBS洗滌3次。DAB顯色，用中性樹脂封片。
對(duì)照設(shè)置：陽(yáng)性對(duì)照片染色步驟同上述；陰性對(duì)照片用PBS代替一抗；其余步驟同上。
2.3 檢測(cè)裸鼠組織中凋亡指數(shù)表達(dá)(TUNEL法)組織切片，常規(guī)脫蠟，20μg/ml的蛋白酶K室溫下消化20 min，PBS洗5 min×3次。3%H2O2甲醇液阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶20 min。PBS洗5 min×3次。3%牛血清白蛋白阻斷20 min， PBS洗滌，TUNEL反應(yīng)液，60 min，PBS洗3次，加入轉(zhuǎn)換液，37℃，30 min。PBS洗滌3次。DAB顯色，3～5 min，蘇木素染10～20 min，電吹風(fēng)吹干，中性樹脂封片。
對(duì)照設(shè)置：陽(yáng)性照片為加TUNEL反應(yīng)液前用DNA酶Ⅰ消化30min，陰性對(duì)照片不加TUNEL反應(yīng)液中的TdT，其余步驟同上。
2.4 免疫組化判斷
2.4.1 對(duì)照染色每批染色的陽(yáng)性對(duì)照片應(yīng)顯示為陽(yáng)性，陰性對(duì)照片應(yīng)顯示為陰性，否則整批片重染。
2.4.2 免疫組化染色陽(yáng)性判斷標(biāo)準(zhǔn)hTERT蛋白陽(yáng)性反應(yīng)位于胞漿和胞核中表達(dá)；Bcl-2，Bax蛋白陽(yáng)性反應(yīng)位于胞漿內(nèi)表達(dá)，呈棕褐色或棕黃色。
2.4.3 免疫組化染色分級(jí)在全片上、下、左、右、中各隨機(jī)選取一個(gè)400倍視野，觀察每個(gè)視野中陽(yáng)性細(xì)胞的染色強(qiáng)度及該強(qiáng)度細(xì)胞占視野中所有癌細(xì)胞的百分率。
分級(jí)：按陽(yáng)性細(xì)胞占總細(xì)胞數(shù)的百分率分4級(jí)，I級(jí)：5%～25%；II級(jí)：26%～50%；III級(jí)：51%～75%；IV級(jí)：﹥75%。≥5%作為陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)，
陽(yáng)性細(xì)胞的染色強(qiáng)度分為4級(jí)：1級(jí)：（±）；2級(jí)：（+）；3級(jí)：（++）；4級(jí)：（+++）。各陽(yáng)性對(duì)照片的染色強(qiáng)度定為4級(jí)作為參照。
一個(gè)視野的免疫組化染色得分［6］=該視野中的各種染色強(qiáng)度與該強(qiáng)度陽(yáng)性細(xì)胞的百分率級(jí)別的乘積之和，即染色強(qiáng)度為1級(jí)的陽(yáng)性細(xì)胞百分率級(jí)別×1＋染色強(qiáng)度為2級(jí)的陽(yáng)性細(xì)胞百分率級(jí)別×2＋染色強(qiáng)度為3級(jí)的陽(yáng)性細(xì)胞百分率級(jí)別×3＋染色強(qiáng)度為4級(jí)的陽(yáng)性細(xì)胞百分率級(jí)別×4。該組織的免疫組化染色綜合得分=5個(gè)視野的免疫組化染色得分之總和÷5。
2.4.4 細(xì)胞凋亡判斷及記數(shù)凋亡細(xì)胞核固縮呈圓形或橢圓形、藍(lán)黑色，染色體沿核膜形成半月狀或新月狀，部分核凝固成致密小圓球形。光鏡下隨機(jī)選取5個(gè)以上高倍視野，每個(gè)視野不少于1000個(gè)細(xì)胞，按陽(yáng)性細(xì)胞占細(xì)胞總數(shù)的百分率作為凋亡指數(shù)。
2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件，數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，兩樣本均數(shù)的比較用t檢驗(yàn)。多個(gè)樣本均數(shù)的比較，方差齊用q檢驗(yàn)法，方差不齊用秩和檢驗(yàn)；率的比較用確切概率法；相互依存關(guān)系的檢驗(yàn)用方差分析F檢驗(yàn)。
3 結(jié)果
3.1 腫瘤組織病理學(xué)觀察各組裸鼠解剖時(shí)均未見胸水、腹水；聯(lián)合組瘤體最小，易剝離，血供較差，切面灰白，并有液化壞死區(qū)域。顯微鏡下見對(duì)照組癌細(xì)胞生長(zhǎng)旺盛，形成癌巢，細(xì)胞形態(tài)不規(guī)則，大小不等，核大呈圓形或卵圓形，核膜增厚，核分裂相較多。藥物作用后聯(lián)合用藥D組癌細(xì)胞呈大片壞死，結(jié)構(gòu)不清，大部分癌細(xì)胞崩解，偶見殘余的癌細(xì)胞，間質(zhì)纖維化，角質(zhì)物質(zhì)增多癌組織發(fā)生退行性變化，高劑量A組、低劑量B組及常規(guī)治療C組癌細(xì)胞變性壞死，偶見核分裂相，部分癌細(xì)胞核固縮，腫瘤退行性變較對(duì)照E組明顯。各組HE染色見圖1。
3.2 裸鼠腫瘤組織hTERT蛋白表達(dá)hTERT蛋白陽(yáng)性表達(dá)大部分在胞漿，少部分在胞核，（見圖2）。染色綜合得分比較（見表1）。各用藥組與對(duì)照組比較，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P
3.3 裸鼠腫瘤組織Bcl-2蛋白表達(dá)Bcl-2蛋白陽(yáng)性表達(dá)在胞漿，（見圖3）。染色綜合得分比較（見表2）。各用藥組與對(duì)照組比較，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P
3.4 裸鼠腫瘤組織Bax蛋白表達(dá)Bax蛋白陽(yáng)性表達(dá)在胞漿，（見圖4）。染色綜合得分比較（見表3）。各用藥組綜合得分高于對(duì)照組，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P
3.5 裸鼠腫瘤組織凋亡指數(shù)的變化表達(dá)凋亡細(xì)胞核固縮呈圓形或橢圓形、藍(lán)黑色，染色體沿核膜形成半月狀或新月狀。部分核凝固成致密小圓球形，（見圖5）。凋亡指數(shù)的變化（見表4），其直方圖，（見圖6）。各用藥組與對(duì)照組比較，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P
凋亡指數(shù)：聯(lián)合用藥D組>高劑量A組>順鉑常規(guī)化療C組>低劑量B組>對(duì)照E組。
3.6 裸鼠組織不同組hTERT，BCl-2及Bax染色綜合得分比較根據(jù)表1～3，將測(cè)定各蛋白表達(dá)的結(jié)果匯總，獲得直方圖。見圖7。表4 裸鼠腫瘤組織凋亡指數(shù)表達(dá)（略）
從圖7結(jié)果可知，hTERT與Bcl-2表達(dá)： 聯(lián)合用藥D組對(duì)照E組。
4 結(jié)論
細(xì)胞凋亡(apoptosis)是細(xì)胞在一定生理或病理?xiàng)l件下，遵循自身的程序，自我結(jié)束生命的過(guò)程。它是一個(gè)主動(dòng)的、高度有序的、多基因控制的、一系列酶參與的過(guò)程，BCl-2，Bax是與凋亡最相關(guān)的調(diào)控基因。
Bcl-2最初是從人的濾泡性B細(xì)胞淋巴瘤中分離出來(lái)的，它定位于人第18號(hào)染色體，在淋巴瘤中極易發(fā)生染色體易位t（14；18），使Bcl-2與14號(hào)染色體上IgH基因并列導(dǎo)致過(guò)度表達(dá)，是至今為止研究最深入、最廣泛的凋亡調(diào)控基因之一。Bcl-2基因表達(dá)產(chǎn)物是一種細(xì)胞內(nèi)膜蛋白，主要位于線粒體內(nèi)膜、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和核膜［3］。通過(guò)抵抗多種形式的細(xì)胞死亡，延長(zhǎng)細(xì)胞壽命，使細(xì)胞數(shù)目累積增多而促進(jìn)腫瘤的形成。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，裸鼠腫瘤組織空白對(duì)照組Bcl-2染色綜合得分最高，隨著漢黃芩素和順鉑作用后抑瘤率的增強(qiáng)，Bcl-2染色綜合得分下降，表明Bcl-2與腫瘤形成有關(guān)。Bcl-2的抗凋亡機(jī)制有以下幾種可能：①Bcl-2具有膜轉(zhuǎn)運(yùn)功能，能抑制細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)Ca2+的釋放，而細(xì)胞凋亡中DNA消化需要Ca2+依賴性核酸內(nèi)切酶參與，推測(cè)Bcl-2可通過(guò)改變細(xì)胞器的Ca2+來(lái)抑制凋亡［4］。②Bcl-2能夠抑制線粒體膜通透性轉(zhuǎn)運(yùn)孔開放和維持線粒體跨膜電位，進(jìn)而阻止線粒體內(nèi)細(xì)胞色素C和凋亡誘導(dǎo)因子的釋放，從而抑制凋亡［5］；③Bcl-2通過(guò)其BH4結(jié)構(gòu)與Ced-4/Apaf-1結(jié)合，扣押Apaf-1/capase-9復(fù)合物或抑制其形成，進(jìn)而抑制凋亡［6］。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)裸鼠組織經(jīng)藥物作用后，隨著藥物抑制腫瘤作用的提高，Bcl-2蛋白表達(dá)逐漸下調(diào)，與凋亡指數(shù)變化的表達(dá)呈相反變化趨勢(shì)，可能與漢黃芩素抑制Bcl-2基因表達(dá)有關(guān)。
Bax是1993年克隆成功的一種基因，其翻譯產(chǎn)物與Bcl-2蛋白大約有21%的氨基酸序列同源，也被稱為Bcl-2家族成員之一，其作用與Bcl-2相反，能促進(jìn)細(xì)胞凋亡［7］。Bax蛋白廣泛分布于人體許多細(xì)胞和組織中，而在多數(shù)腫瘤組織及細(xì)胞系中表達(dá)下降［8］，在腫瘤形成過(guò)程，Bax大量激活或表達(dá)，通過(guò)促進(jìn)細(xì)胞凋亡，抑制腫瘤形成。有研究發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染Bax基因不僅可使多種細(xì)胞發(fā)生凋亡，而且可使放射線和化療藥物等許多因素誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡［9］。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，隨著藥物抑制腫瘤作用的增強(qiáng)，Bax蛋白染色綜合得分增加了，裸鼠組織Bax蛋白表達(dá)與凋亡指數(shù)變化的表達(dá)呈同向變化趨勢(shì)，可能與漢黃芩素促進(jìn)Bax基因表達(dá)，從而誘導(dǎo)了細(xì)胞凋亡有關(guān)。
腫瘤的發(fā)生，一方面源于腫瘤細(xì)胞過(guò)度增殖，另一方面與細(xì)胞凋亡相對(duì)不足有關(guān)。端粒酶與凋亡的關(guān)系引起了人們極大的興趣［10］。Fu等［11］通過(guò)對(duì)嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞PC12中的觀察發(fā)現(xiàn)端粒酶活性隨Bcl-2表達(dá)增強(qiáng)而升高，Bcl-2的抑制劑可使端粒酶活性迅速下降。張百紅［12］等研究證明苦參堿能顯著抑制SGC-7901胃癌細(xì)胞的Bcl-2的表達(dá)；凋亡抑制基因Bcl-2能夠調(diào)節(jié)端粒酶的活性，當(dāng)Bcl-2過(guò)量表達(dá)時(shí)，端粒酶活性增強(qiáng)；當(dāng)Bcl-2表達(dá)量下降后，端粒酶活性也下降。Mahitosh等［13］研究表明，抗凋亡基因Bcl-2過(guò)度表達(dá)和凋亡基因Bax表達(dá)下降可導(dǎo)致端粒酶活性顯著增加。本實(shí)驗(yàn)也發(fā)現(xiàn)，經(jīng)漢黃芩素作用后隨著濃度增加，抑瘤率的提高，凋亡現(xiàn)象逐漸明顯，端粒酶hTERT蛋白、Bax蛋白表達(dá)逐漸下調(diào)，而Bcl-2蛋白表達(dá)逐漸增強(qiáng)。端粒酶活性、hTERT蛋白的下調(diào)伴隨Bax蛋白表達(dá)的增強(qiáng)、Bcl-2蛋白表達(dá)的減弱，說(shuō)明端粒酶與凋亡密切相關(guān)。無(wú)限增殖是腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)特征，增殖失控關(guān)鍵在于端粒酶的激活；同樣凋亡調(diào)控功能失調(diào)也與腫瘤的形成有關(guān)，可以推測(cè)凋亡相關(guān)基因Bcl-2，Bax直接或間接參與端粒酶活性的調(diào)控。下調(diào)端粒酶活性，同時(shí)也伴隨細(xì)胞的凋亡，可能是藥物對(duì)端粒活性的抑制和對(duì)端粒結(jié)構(gòu)的破壞，啟動(dòng)了凋亡基因。然而端粒酶的活性調(diào)節(jié)是一個(gè)復(fù)雜的系統(tǒng)，漢黃芩素如何抑制端粒酶活性、怎樣調(diào)節(jié)凋亡相關(guān)基因如Bcl-2，Bax而發(fā)揮作用機(jī)制仍不明確，需要我們進(jìn)一步通過(guò)信號(hào)傳導(dǎo)通路來(lái)證實(shí)。
參考文獻(xiàn)
［1］黎丹戎，侯華新，張 瑋，等.漢黃芩素誘導(dǎo)卵巢癌A2780細(xì)胞凋亡及對(duì)細(xì)胞端粒酶活性的影響［J］. 癌癥， 2003，22（8）：801.
［2］Ishimaru K， Nishikawa K， Omoto T， el al. Two flavone 2'-glucosides from sectellaria baicalensis ［J］. Phytoehemistry， 1995， 40(1): 279.
［3］Zamzami N，Brenner C，Marzo I，et al.Subcellular and submitochondrial mode of action of Bcl-2-like oncoproteinss［J］.Oncogene，1998，16(17):2265.
［4］Lam M，Dubyak G，Chen，et al.Evidence that Bcl-2 represses apoptosis by regulting endoplasmic reticulum-associated Ca2+ fluexes［J］.Proc Natl Acad Sci USA，1994，91(14):6569.
［5］Susin SA，Zamzami N， Castedo M，et al.Bcl-2 inhibits the mitochondrial release of an apoptogenic protease［J］.J Exp Med，1996，184(4):1331.
［6］Wang HG and Reed Jc.Mechanisms of Bcl-2 proteins function［J］. Histol Histopathol，1998，13(2):521.
［7］Sharma H， Sen S， Mathur M， et al.Combined evaluation of expression of telomerase， survivin， and anti-apoptotic Bcl-2 family members in relation to loss of differentiation and apoptosis in human head and neck cancers［J］.Head Neck，2004，26(8):733.
［8］Sturm I，Papadopoulos S，Hillebrand T，et al.Impaired BAX proteins expression in breast cancer:mutational analysis of the Bax and the P53 gene［J］.Int J Cancer 2000，87(4):517.
［9］Arafat WO，Gomez-Navarro J，et al.An adenovirus encoding proapoptotic Bax induces apoptosis and enchances the radiation effected in human ovarian cancer［J］.Mol Ther，2000，1(6):545.
［10］Zhang JF， Chen GH， Lu MQ， et al. Change of Bcl-2 expression and telomerase during apoptosis induced by oridonin on human hepatocelluar carcinoma cells［J］ .Zhongguo Zhong Yao Za Zhi， 2006，31(21):1811.
［11］Fu Wm，Begley JG，Michael W，et a1．Anti-apoptotic role of telomerase in pheochromocytoma cells［J］. Biol Chem，1999，274(1l):7264.
探親旅游簽證
(一)、申請(qǐng)赴德國(guó)探親簽證的手續(xù)
德國(guó)移民法規(guī)定具備下列條件之一者，可以申請(qǐng)前往德國(guó)探親：
(1)德國(guó)公民的配偶；
(2)德國(guó)公民的父母(包括養(yǎng)父母)、子女(包括養(yǎng)子女)；
(3)德國(guó)公民的兄弟姐妹(包括同父異母或異父同母的兄弟姐妹)；
(4)其他適合德國(guó)法律規(guī)定可以探親的外國(guó)公民。
中國(guó)公民前往德國(guó)探親或旅游，可持下列的證明材料前往德國(guó)駐華使領(lǐng)館申辦簽證：
(1)在德國(guó)的親屬朋友的邀請(qǐng)信件；
(2)在德國(guó)的親屬朋友出具的、經(jīng)過(guò)當(dāng)?shù)赝鈬?guó)人管理局或律師所公證的經(jīng)濟(jì)擔(dān)保書；
(3)申請(qǐng)人所在地公證機(jī)關(guān)出具的親屬關(guān)系證明；
(4)申請(qǐng)者身體健康證明(入境居留超過(guò)3個(gè)月的需此證，居留不超過(guò)3個(gè)月的則不需此證)；
(5)有效的中國(guó)護(hù)照；
(6)填寫簽證申請(qǐng)表(居留不超過(guò)3個(gè)月的填2份，超過(guò)3個(gè)月的填3份)，申請(qǐng)表上須貼照片。
上述證明材料，申請(qǐng)人可以委托中國(guó)旅行社代辦轉(zhuǎn)交大使館，也可以用郵寄方式遞交德國(guó)駐華大使館或上海領(lǐng)事館。
(二)、申請(qǐng)旅游簽證的手續(xù)
申請(qǐng)有效期不超過(guò)3個(gè)月的德國(guó)旅游簽證，須遞交以下材料并符合下列條件：
(1)認(rèn)真填寫并貼上照片的黃色申請(qǐng)表，一式2份；
(2)有效護(hù)照；
(3)德國(guó)的某一旅行社的預(yù)訂證明，證明中須寫明旅游日程安排、往返和當(dāng)?shù)亟煌白∷耷闆r，團(tuán)體旅游者須有個(gè)人的預(yù)定證明(旅館、旅行情況)；
(4)交付旅行費(fèi)用證明；
(5)醫(yī)療保險(xiǎn)證明(保險(xiǎn)公司證明)每人一份；
(6)用德文或英文書寫的工作單位提供的證明：工作崗位，月工資，準(zhǔn)假證明。
(三)、探親旅游入境居留的規(guī)定
德國(guó)對(duì)外國(guó)人入境和居留還規(guī)定：
(1)外國(guó)人前往德國(guó)探親，獲得入境簽證后，還應(yīng)申領(lǐng)居留許可證。可先委托在德國(guó)的親屬朋友事先向外國(guó)人管理局申請(qǐng)代辦，也可在入境后再申辦。
(2)入境后如果變更居留地點(diǎn)，要及時(shí)向外國(guó)人管理局報(bào)告。
2、證明遺贈(zèng)撫養(yǎng)協(xié)議,收費(fèi)10~50元; 3、證明印鑒屬實(shí),證明副本、節(jié)本、譯本與原本相符、證明影印件與原件相符,收費(fèi)5元; 4、證明遺囑、遺贈(zèng)、證明產(chǎn)權(quán)、證明查無(wú)檔案記載,收費(fèi)10元;
5、證明法人資格、收養(yǎng)、財(cái)產(chǎn)分割、證明產(chǎn)品抽樣檢測(cè),收費(fèi)10~30元;
6、證明擔(dān)保書、證明公司章程、資信情況等有關(guān)文書,收費(fèi)50~200元;
7、證明商標(biāo)注冊(cè),收費(fèi)50元;
8、證明勞動(dòng)保險(xiǎn)金、養(yǎng)老金、子女助學(xué)金的,每件收費(fèi)5元;
9、證明招標(biāo)、拍賣、開獎(jiǎng)、收費(fèi)100~150元;
10、證明勞務(wù)合同,收費(fèi)5元;
11、起草、修改合同文本,收費(fèi)5~20元;
12、證明股票、房屋轉(zhuǎn)讓、買賣、土地使用權(quán)有償轉(zhuǎn)讓的,按股票面額或房?jī)r(jià)的千分之三收費(fèi),但最低收費(fèi)不得低于10元;
13、證明財(cái)產(chǎn)繼承、贈(zèng)與:
接受益人收金額總數(shù)收費(fèi)
(1)不滿1萬(wàn)元的,按1%收費(fèi),但最低收費(fèi)10元;
(2)1萬(wàn)元以上的,按2%收費(fèi)。
14、證明債權(quán)文書有強(qiáng)制執(zhí)行效力的,按債務(wù)總金額的千分之三收費(fèi),原債權(quán)文書經(jīng)過(guò)公證的,按千分之一收費(fèi),最低收費(fèi)10元。
15、翻譯,每千字15元,不足千字的按千字計(jì)。
外文打字,每千字2元。
外文校對(duì),每千字5元。
16、保管遺囑或其他文件、證據(jù)保全,收費(fèi)5~10元。
17、已受理的立卷中途撤回的,收費(fèi)2~5元;
18、證明經(jīng)濟(jì)合同、企業(yè)承包、經(jīng)營(yíng)合同:
(1)標(biāo)的總額不滿10萬(wàn)元的,收費(fèi)10~50元;
(2)10萬(wàn)元以上不滿50萬(wàn)元的,收費(fèi)100元;
(3)50萬(wàn)元以上不滿100萬(wàn)元的,收費(fèi)300元;
(4)100萬(wàn)元以上不滿200萬(wàn)元的,收費(fèi)600元;
(5)200萬(wàn)元以上不滿300萬(wàn)元的,收費(fèi)1000元;
(6)300萬(wàn)元以上不滿400萬(wàn)元的,收費(fèi)2000元;
日本的簽證分為長(zhǎng)期簽證和短期簽證兩種：居留期限在1年以下的為短期簽證，1年以上(最長(zhǎng)為3年)的為長(zhǎng)期簽證。長(zhǎng)期簽證主要包括留學(xué)簽證、學(xué)術(shù)交流簽證、教育傳授簽證、普通工作簽證、高級(jí)勞務(wù)簽證。還有若干種類特殊簽證，如日本孤兒、日本人的中國(guó)配偶等，以及因公務(wù)的外交、新聞、貿(mào)易簽證等。
按照日本入境管理法的規(guī)定，外國(guó)人有一定的專業(yè)特長(zhǎng)的，日本允許他們?cè)谌毡揪恿粢欢ǖ臅r(shí)間，從事一定的工作。通常能夠獲得在日本長(zhǎng)期居留的幾種簽證有：技術(shù)簽證、工作簽證、被撫養(yǎng)者簽證、特殊簽證等。
1.技術(shù)簽證
包括代號(hào)為4－1－7和4－1－12兩種簽證。外國(guó)人中的專家教授、講師、醫(yī)生、翻譯和各種技術(shù)人員，如果被日本有關(guān)企業(yè)或科研機(jī)構(gòu)、學(xué)校雇傭，可以獲此簽證。入境后，一般允許居留1年，以后再憑雇傭證明申請(qǐng)延期到3年。這些入境者的配偶和未成年子女，也可以同時(shí)入境居留。
2.工作簽證
簽證的代號(hào)為4－1－13，是發(fā)給各種熟練工人的入境簽證。例如，接受雇傭的中國(guó)廚師，受日本人或華僑開設(shè)飯館的雇傭，可以以此種身份入境。這種入境簽證有效期為1年，對(duì)有特殊技能的勞工，1年期滿后，可以申請(qǐng)2次延期，居留3年時(shí)間，3年居留滿后，必須出境。而后，他們?cè)趪?guó)外再重新申請(qǐng)入境，可繼續(xù)居留3年。只要有雇主雇傭，每隔3年就可以重新入境1次，不受入境次數(shù)的限制。
3.被撫養(yǎng)者簽證
通常是指在日本華僑的父母、配偶或未成年子女，可以申請(qǐng)此種簽證。簽證期限一般為簽證期滿后，可要求延期居留，以后可以得到3年有效的居留簽證，都可長(zhǎng)期居留下去，這類簽證實(shí)質(zhì)上就是移民簽證。
4.特殊簽證
這種簽證主要是發(fā)給具有日本血統(tǒng)或與日本有血緣關(guān)系的人，有效期為3年，可以申請(qǐng)延期，直至取得永久居留權(quán)利。按照日本有關(guān)法律規(guī)定。連續(xù)在日本居留10年以上，就能獲得永久居留權(quán)，如日本血統(tǒng)人、日本公民的外國(guó)籍配偶、對(duì)日本有顯著貢獻(xiàn)者，這類簽證實(shí)際上是移民簽證。
日本簽證的有效期限，除外交及公務(wù)護(hù)照外，原則上過(guò)境和觀光簽證為4個(gè)月；其他簽證為6個(gè)月。有效入境次數(shù)，原則上僅限一次，再度入境時(shí)必須重新進(jìn)行簽證。例外者，如果確認(rèn)屬于必要，也給予2次或數(shù)次有效簽證。
申請(qǐng)途徑
根據(jù)日本法律的規(guī)定，不同種類的簽證，應(yīng)按照不同的方式進(jìn)行申請(qǐng)。技術(shù)簽證與工作簽證，應(yīng)當(dāng)由聘請(qǐng)或雇傭部門向當(dāng)?shù)氐娜雵?guó)管理局提出申請(qǐng)，即申請(qǐng)入境許可。申請(qǐng)時(shí)必須提供聘請(qǐng)書、合同書、擔(dān)保書等證明材料。入國(guó)管理局呈報(bào)法務(wù)省核準(zhǔn)后，便發(fā)給一份有簽證代號(hào)的《號(hào)留資格證明書》向日本駐華大使館或領(lǐng)事館申請(qǐng)簽證。
被撫養(yǎng)者簽證和特殊簽證，一般由申請(qǐng)人直接向日本駐華大使館或領(lǐng)事館申請(qǐng)即可。申請(qǐng)時(shí)出具親屬關(guān)系證明，擔(dān)保證明或工作采用證明。在日本出生的，出具戶籍譽(yù)本就可以，而不再出具其他證明。從申請(qǐng)到取得入境簽證，一般需要3個(gè)月至半年左右。
申請(qǐng)日本簽證通常可有兩種方式：一種是由申請(qǐng)人在國(guó)外向日本使領(lǐng)事館提出申請(qǐng)。一種是由旅居日本的親友向所在地的入國(guó)管理局提出申請(qǐng)。無(wú)論采取哪一種方法，最后都是經(jīng)過(guò)法務(wù)省批準(zhǔn)后，授權(quán)大使館或領(lǐng)事館簽發(fā)入境簽證的。
1.向日本駐外使領(lǐng)館申請(qǐng)的程序
無(wú)論是做工，還是定居等，均可以由申請(qǐng)人直接向日本駐在當(dāng)?shù)氐念I(lǐng)事館申請(qǐng)簽證。填寫簽證申請(qǐng)表格，遞交與申請(qǐng)事由相應(yīng)的證明材料。然后，由日本大使館或領(lǐng)事館將有關(guān)檔案材料報(bào)回日本外務(wù)省，外務(wù)省轉(zhuǎn)送法務(wù)省，再由法務(wù)省會(huì)同有關(guān)部門共同審核。申請(qǐng)高級(jí)勞務(wù)簽證的，則需送到通產(chǎn)省核準(zhǔn)。如無(wú)不同意見，再由外務(wù)省批示駐大使館或領(lǐng)事館簽發(fā)簽證。從申請(qǐng)到取得簽證，一般需要3個(gè)月左右時(shí)間。
2.在日本國(guó)內(nèi)向入境管理局申請(qǐng)的程序
加拿大是一個(gè)由世界各地移民組成，靠移民發(fā)展壯大的國(guó)家，但加拿大不把自己定位為多民族國(guó)家。而是定位為多元文化國(guó)家，表示對(duì)來(lái)自世界各地的移民兼收并蓄，一律平等。移民也一直成為加拿大人口增長(zhǎng)和經(jīng)濟(jì)發(fā)展的基本條件。每年成功申請(qǐng)加拿大身份的中國(guó)人都在3萬(wàn)人以上。加拿大政府2009年的永久居民移民目標(biāo)是24萬(wàn)～26.5萬(wàn)人。
最適合人類居住的地方
自然環(huán)境美麗，這是大多數(shù)新移民對(duì)加拿大的第一印象。加拿大位列7大工業(yè)國(guó)之一，經(jīng)濟(jì)高度發(fā)達(dá)，環(huán)境同樣無(wú)與倫比，雪山碧海、湖光山色散發(fā)著無(wú)窮魅力。地廣人稀，許多地方還處于未受明顯干擾的原始狀態(tài)。另外，加拿大人的環(huán)境保護(hù)意識(shí)十分強(qiáng)烈，許多人都在致力于環(huán)境保護(hù)工作，政府的環(huán)保法令也非常嚴(yán)格。加拿大人為此非常自豪，頗有點(diǎn)“誰(shuí)不說(shuō)俺家鄉(xiāng)好”的味道。
加拿大人的富裕程度和生活質(zhì)量在全世界名列第一。在聯(lián)合國(guó)計(jì)劃開展署公布的人類發(fā)展世界報(bào)告申，每年采用自然地理、資源氣候、環(huán)境質(zhì)量和人民生活居住條件、醫(yī)療衛(wèi)生水平、社會(huì)福利保障、人均壽命、教育水平、實(shí)際人均收入等多項(xiàng)要素綜合評(píng)價(jià)，加拿大已連續(xù)7年蟬聯(lián)“最適合人類居住的地方”這一美譽(yù)。
一人成功全家移民
主申請(qǐng)人條件合格而獲準(zhǔn)移民，則配偶及未成年子女將自動(dòng)獲得移民資格。加拿大在世界先進(jìn)國(guó)家中被列為“社會(huì)主義化的資本主義國(guó)家”，有令人羨慕的社會(huì)福利政策，最主要的有：終身免費(fèi)醫(yī)療，完全免費(fèi)的12年義務(wù)教育，優(yōu)厚的社會(huì)福利金、老年養(yǎng)老金，兒童牛奶金等。
加拿大鼓勵(lì)各族裔保留發(fā)揚(yáng)自己的文化，這和同是移民國(guó)家的“民族大熔爐”――美國(guó)形成鮮明對(duì)比。另外，與美國(guó)的緊縮移民政策不同，加拿大熱情歡迎海外各地的移民。并且，加拿大沒有種族歧視，社會(huì)治安穩(wěn)定。對(duì)于難于到達(dá)美國(guó)或難于留在美國(guó)、歐洲及其他非移民國(guó)家的華人，移民加拿大后既可以自由方便地進(jìn)出美國(guó)及世界各地，又可以享受比美國(guó)等國(guó)家犯罪率低、無(wú)歧視的社會(huì)環(huán)境。
加拿大護(hù)照――世界通行證
住滿3年后，移民就有資格申請(qǐng)取得加拿大國(guó)籍。持加拿大護(hù)照可以全世界通行，自由出入100多個(gè)國(guó)家。可以免簽證人境的國(guó)家包括：美國(guó)、英國(guó)、澳大利亞、新西蘭、丹麥、芬蘭、挪威、瑞典、瑞士、德國(guó)、意大利、比利時(shí)、巴西、新加坡、西班牙、葡萄牙以及沙特阿拉伯等國(guó)。
同時(shí)，加拿大承認(rèn)雙重及多重國(guó)籍。為了吸引更多的移民，加拿大還打算修改移民法，將入籍時(shí)間放松至“移民在加拿大住滿2年就有資格申請(qǐng)取得加拿大國(guó)籍”。即使不入加拿大籍，有加拿大永久居民簽證之后，申請(qǐng)前往第三國(guó)的簽證也容易很多。比如，現(xiàn)在瑞士政府對(duì)持有加拿大永久居民簽證的某些第三國(guó)公民給予免簽證進(jìn)入瑞士的待遇，中國(guó)公民在此范圍之內(nèi)。
華裔商人回國(guó)投資獲優(yōu)惠
在取得加拿大公民身份后，華裔商人回國(guó)經(jīng)商在經(jīng)營(yíng)和稅收上將享受特別的待遇。一般表現(xiàn)為地方政府大力扶持，在部分行業(yè)經(jīng)營(yíng)上給予特殊政策優(yōu)惠，減免國(guó)家與地方稅收全額，放寬特定行業(yè)的經(jīng)營(yíng)范圍等。
拓寬子女的發(fā)展空間
在加拿大，任何公民只要年滿5歲，都可以選擇居住區(qū)內(nèi)的公立學(xué)校人讀，高中畢業(yè)之前的12年教育所有費(fèi)用全免。上大學(xué)只需通過(guò)高中畢業(yè)考試，可通過(guò)教育基金為孩子儲(chǔ)存上大學(xué)的費(fèi)用，即只要每年存入銀行固定賬戶2000加元，政府就會(huì)每年貼補(bǔ)400加元直到孩子18歲，當(dāng)然這筆錢必須完全用于孩子上大學(xué)。此外，也可靠政府提供的助學(xué)金、學(xué)校頒發(fā)的獎(jiǎng)學(xué)金或者申請(qǐng)低息甚至無(wú)息的學(xué)習(xí)貸款來(lái)完成學(xué)業(yè)。
如果想在國(guó)外得到高薪的職位或較高的社會(huì)地位，沒有一個(gè)被廣泛承認(rèn)的文憑是不行的。加拿大的文憑在全世界都得到承認(rèn)。有了移民身份。在加拿大攻讀學(xué)位的學(xué)費(fèi)與加拿大公民相同，只相當(dāng)于海外留學(xué)生的1/3～1/4，籌不到錢可以貸款。如果失業(yè)，政府還會(huì)發(fā)給補(bǔ)貼讓其去參加培訓(xùn)或讀書。
移民加拿大之途徑
移民加拿大主要有以下途徑。
投資類移民
聯(lián)邦投資移民、魁北克投資移民均屬此類。申請(qǐng)人須具有實(shí)際經(jīng)營(yíng)或高級(jí)行政管理經(jīng)驗(yàn)，且擁有不少于80萬(wàn)加元(約合人民幣496萬(wàn)元)的個(gè)人總資產(chǎn)值。所需費(fèi)用如下。
投資款 按照加拿大投資移民的申請(qǐng)要求，在經(jīng)過(guò)面談并獲得批準(zhǔn)后，申請(qǐng)人需要履行一個(gè)投資義務(wù)，可通過(guò)兩種方式實(shí)現(xiàn)：一是投資40萬(wàn)加元(約合人民幣248萬(wàn)元)到政府指定的基金會(huì)，5年后由政府擔(dān)保收回全部本金，但無(wú)利息收入；二是一次性支付12萬(wàn)加元(約合人民幣75萬(wàn)元)作為40萬(wàn)加元5年的利息，此投資款不能收回，也是移民申請(qǐng)人的主要移民成本。
申請(qǐng)手續(xù)費(fèi)用 主要包括申請(qǐng)費(fèi)用(魁北克省申請(qǐng)費(fèi)、聯(lián)邦申請(qǐng)費(fèi)和登陸費(fèi)等)、文件處理費(fèi)用(翻譯費(fèi)、公證費(fèi)、財(cái)務(wù)報(bào)表的審計(jì)費(fèi)和房產(chǎn)報(bào)告評(píng)估費(fèi)等)以及由移民顧問(wèn)公司收取的咨詢服務(wù)費(fèi)。該費(fèi)用一般為十幾萬(wàn)元人民幣。
技術(shù)類移民
技術(shù)移民是最主要的，也是最可行的形式之一。技術(shù)移民屬于獨(dú)立移民的一種形式。簡(jiǎn)單地說(shuō)，就是憑申請(qǐng)人的文化程度、職業(yè)技能、語(yǔ)言及適應(yīng)能力等方面的綜合實(shí)力來(lái)申請(qǐng)移民。一般應(yīng)有大專以上學(xué)歷，年齡21～49歲，英語(yǔ)或法語(yǔ)熟練，有一定工作經(jīng)驗(yàn)且從事職業(yè)需符合加拿大緊缺職業(yè)列表。所需費(fèi)用如下。
申請(qǐng)費(fèi) 由移民局收取。主申請(qǐng)人550加元/人，配偶及22周歲以上隨行子女550加元/人，22周歲以下隨行子女150加元／人。
移民登陸費(fèi) 該費(fèi)用可退還。主申請(qǐng)人、配偶490加元，人。
間接費(fèi)用 申請(qǐng)過(guò)程中，會(huì)產(chǎn)生諸如咨詢費(fèi)、服務(wù)費(fèi)、公證費(fèi)等的間接費(fèi)用，約3～5萬(wàn)元人民幣。如果自行申請(qǐng)，則只需公證等費(fèi)用。
企業(yè)家移民
申請(qǐng)人須具有經(jīng)商經(jīng)驗(yàn)，擁有足夠的資金，且有能力在加拿大創(chuàng)辦企業(yè)或收購(gòu)現(xiàn)成生意，此為有條件簽證。既投資人取得移民簽證后，要在3年內(nèi)創(chuàng)辦或者收購(gòu)1個(gè)企業(yè)，如果不能完成則會(huì)被命令離境。
自雇類移民
申請(qǐng)人具有能力自我創(chuàng)業(yè)以及促進(jìn)加拿大經(jīng)濟(jì)發(fā)展或提升該國(guó)文化、藝術(shù)生活，且擁有約20萬(wàn)加元的資產(chǎn)值。適合一些文化或藝術(shù)專業(yè)人士申請(qǐng)，且必須以記分方法評(píng)審。
依親／家庭團(tuán)聚移民
申請(qǐng)人由已合法居留于加境的親屬簽具擔(dān)保書，并取得加拿大移民部加簽確認(rèn)，以支持申請(qǐng)。包括居民或公民申請(qǐng)配偶、父母、子女等。只需提供收入證明有能力供養(yǎng)親屬，條件比較寬松。
移民要慎重
一場(chǎng)意外導(dǎo)致由F2到F1
到美國(guó)留學(xué)的人都知道，在申請(qǐng)留美簽證時(shí)，自己的留學(xué)生簽證叫F1簽證，而配偶去美國(guó)陪讀時(shí)申請(qǐng)的簽證叫F2簽證。所以好多陪讀的人，都戲稱自己是:F2。
陶靜就是美國(guó)田納西州大學(xué)機(jī)械系博士生牛磊的妻子，在牛磊來(lái)到美國(guó)田納西州大學(xué)讀博的第二年，她也就自然而然的申請(qǐng)F(tuán)2來(lái)到美國(guó)，與老公一同在美國(guó)生活。陶靜原本是國(guó)內(nèi)知名大學(xué)的碩士畢業(yè)，來(lái)美國(guó)的目的就是想照料老公牛磊的起居生活，希望他能夠早日完成博士課程。而牛磊呢，在學(xué)校是全額獎(jiǎng)學(xué)金，每月1500美金，兩個(gè)人生活，小康稱不上，但也足能夠解決二人的溫飽了。但陪讀的生活并不像兩人想象的那樣，老公專心讀書，老婆操持家務(wù)，而變成了兩個(gè)人一起讀書，成了真正的“陪讀”。
陶靜來(lái)之前，牛磊為了給老婆一個(gè)驚喜，也為了日后兩人生活的方便，新買了輛汽車，陶靜剛剛踏上美國(guó)的土地，來(lái)到學(xué)校里，牛磊就迫不及待的想向老婆展示一下他們的新車。傍晚，天剛剛擦黑，二人就來(lái)到停車場(chǎng)，開動(dòng)自己的新車子。不知是二人剛剛團(tuán)聚興奮的原因，還是因?yàn)榕＠趧倓傎I了車子，技術(shù)還不夠嫻熟所致，總之，在打算把車子開出停車場(chǎng)的時(shí)候，誤把油門當(dāng)剎車，一連撞了六輛車子，其中一輛情況嚴(yán)重，五輛不同程度的刮傷。由于車子是剛買的，還沒有來(lái)得及上各種保險(xiǎn)，這一下可把倆人嚇壞了！陶靜回憶當(dāng)時(shí)的情況說(shuō)：“我當(dāng)時(shí)腦子里一片空白，一句話也說(shuō)不出來(lái)了，牛磊也傻在那兒了。興奮的感覺一下子就凝固住了。”
沒有保險(xiǎn)，六輛車子的賠償金不是一筆小數(shù)目。陶靜怎么也沒有想到，陪讀生活的第一天，不像別人說(shuō)的那樣，洗衣服做飯，成為幸福的小婦人，而在這場(chǎng)油門當(dāng)剎車的車禍中結(jié)束了她剛踏上美國(guó)之路的興奮。當(dāng)時(shí)他們?cè)?jīng)想怎么樣去償還這筆賠償金，陶靜想到了回國(guó)找工作，因?yàn)橐訤2的身份是不允許打工的，也就是說(shuō)她只能花錢不能掙錢；牛磊想到了申請(qǐng)個(gè)人破產(chǎn)，在美國(guó)的法律中是允許個(gè)人申請(qǐng)破產(chǎn)的，但是這樣對(duì)今后的生活會(huì)有影響，這會(huì)記錄在案，跟著自己一輩子。
倆人還在發(fā)愁怎么解決的時(shí)候，各個(gè)大學(xué)又開始了招生，許多在國(guó)內(nèi)的同學(xué)都托他們打聽一些學(xué)校的情況，什么住宿條件、獎(jiǎng)學(xué)金的數(shù)額等，牛磊此時(shí)突發(fā)奇想：“不如陶靜你也申請(qǐng)讀博士吧，你條件好，全獎(jiǎng)是沒有問(wèn)題的，每月1500美金，兩人就是3000，一個(gè)月下來(lái)能攢不少，這樣錢就可以還上了”。陶靜想想，F(xiàn)2不能打工，沒有收入來(lái)源，不如去讀個(gè)書，有獎(jiǎng)學(xué)金還能再讀個(gè)學(xué)位，何樂(lè)不為？
“我沒想到，F(xiàn)2的生活是那么短暫，為了還上賠償金，我從F2轉(zhuǎn)成了F1，本來(lái)想在美國(guó)做全職太太，沒想到又開始讀書了，這樣到真是陪讀了，陪著牛磊一起讀書，連專業(yè)都是一樣的。”陶靜說(shuō)。
原本以為陪讀生活就會(huì)像保姆一樣，與鍋碗瓢盆為伍，誰(shuí)知道陪讀經(jīng)歷是各有各的不同。一場(chǎng)意外就改變了陪讀身份。
媽媽陪著我的感覺真好
與夫妻陪讀相比，父母陪伴孩子去國(guó)外讀書是目前比較典型的現(xiàn)象。
現(xiàn)在還在新西蘭讀旅游碩士學(xué)位的葦葦，三年本科的學(xué)習(xí)都是由媽媽陪伴她度過(guò)的。回想起與媽媽一起在新西蘭的日子，葦葦說(shuō)：“有媽媽陪讀的感覺真好！”
真得感謝MSN的便捷，記者很容易就得知了葦葦和她媽媽的故事。
在MSN的那一邊，葦葦介紹：按照新西蘭的規(guī)定，17歲以下的外籍學(xué)生可以申請(qǐng)家人陪讀，申請(qǐng)的手續(xù)也很方便。因?yàn)槲乙呀?jīng)過(guò)了這個(gè)年齡，所以，實(shí)際上我媽媽來(lái)新西蘭陪我，申請(qǐng)的是探親簽證，不過(guò)探親簽證的時(shí)間比較短，三個(gè)月。好在與一學(xué)期的時(shí)間相差不多，每個(gè)假期我回國(guó)，回來(lái)后就為我媽媽辦探親手續(xù)，就這樣，基本上也算是全程陪讀了。
你別以為我特別嬌氣，都挺大的了還離不開家人的照顧。主要是我從小就是個(gè)“病秧子”，常年都是“藥拌飯”，練就了特強(qiáng)的吃藥本領(lǐng)，不管什么藥，拿起來(lái)就往嘴里放，一點(diǎn)都不覺得苦。可能是因?yàn)檫@個(gè)原因吧，家里人習(xí)慣了對(duì)我的呵護(hù)，到國(guó)外他們特別不放心，再加上我一到新西蘭就大病一場(chǎng)，所以我媽媽就只好來(lái)陪著我了。
開銷的確是一個(gè)要考慮的問(wèn)題，我媽媽那時(shí)候在這里是給外國(guó)人作臉，也就是美容，所以她的開銷可以自己應(yīng)付。因?yàn)槲野职质菙z影師，在上海開了個(gè)影樓，婚紗攝影需要化妝，媽媽就開始弄美容了。不過(guò)媽媽是探親簽證不能打工，只能打黑工，這樣的話，就要看她是否覺得值得，因?yàn)椋谶@里打工都很辛苦，有沒有必要讓父母到這里來(lái)受苦呢？我媽媽來(lái)是因?yàn)槲业纳眢w不好，沒辦法。
其實(shí)我也很希望她能來(lái)，她來(lái)了，我什么都不用干，可以專心學(xué)習(xí)，沒有寂寞感，還是很開心的。
到后來(lái)，她自己作美容，再后來(lái)我開始跟一些公司簽約工作了。由于工作了錢也不是很緊，所以我們常出去旅游，如果光我一個(gè)人是不會(huì)去的，因?yàn)槟菚r(shí)候我媽媽在，我們就常出去玩兒。
如果經(jīng)濟(jì)實(shí)力條件許可，去陪讀幫幫孩子的生活，也有助于他們的學(xué)習(xí)和工作，讓他們發(fā)展得更好。
陪讀陪讀，也陪也讀
美國(guó)，是很多人向往的，在美國(guó)陪讀的人會(huì)有怎樣的體會(huì)呢？本刊特約記者宗興在美國(guó)采訪了一位陪讀的楊女士。
楊女士介紹說(shuō)：我是跟著我先生來(lái)到美國(guó)的。我倆原來(lái)在國(guó)內(nèi)一所著名高校是同學(xué)，先生是研究生，我讀本科。我原來(lái)沒有想過(guò)要出國(guó)，但是到美國(guó)讀書一直是先生的心愿。他是學(xué)工程的，說(shuō)希望到美國(guó)學(xué)些比較前沿的東西。所以他一上研究生就開始準(zhǔn)備“寄托”，一陣忙碌之后，2003年8月他如愿來(lái)到了美國(guó)南部的一所大學(xué)求學(xué)。
出國(guó)之前，我和先生討論到了我們的將來(lái)，他說(shuō)我們結(jié)婚吧，這樣你可以出來(lái)伴讀。我和家里人去商量，爸爸同意了，但是我媽有點(diǎn)舍不得，她覺得我在國(guó)內(nèi)找份好工作就可以了，沒有必要到一個(gè)陌生的國(guó)家去。7月份的時(shí)候我和先生把證領(lǐng)了。
2004年1月我來(lái)到了美國(guó)。當(dāng)時(shí)剛過(guò)來(lái)的時(shí)候心情特別激動(dòng)，人家說(shuō)“小別勝新婚”，更別提先生在國(guó)外了。
說(shuō)實(shí)話，剛來(lái)美國(guó)挺失望的。覺得小城市的那些建筑比起北京上海來(lái)差遠(yuǎn)了。剛來(lái)一個(gè)月，先生說(shuō)不要太累，好好適應(yīng)一下美國(guó)生活，我說(shuō)好啊，當(dāng)時(shí)每天在家看看電視。我覺得這些年國(guó)內(nèi)英語(yǔ)教學(xué)進(jìn)步挺大的，我在國(guó)內(nèi)經(jīng)常看原版影碟，所以在電視上看到這些情景喜劇的時(shí)候，不算特別吃力。
先生和我商量，說(shuō)我們可以先要一個(gè)孩子。我現(xiàn)在清閑，可以帶孩子。我同意了，很快就懷孕了。懷孕期間我每天還要自己做飯，因?yàn)橄壬趯?shí)驗(yàn)室工作特別辛苦。他一般早上9點(diǎn)去實(shí)驗(yàn)室，晚上5點(diǎn)多回來(lái)吃個(gè)飯，然后就又去實(shí)驗(yàn)室了，都要到11點(diǎn)才能回來(lái)。有的時(shí)候，我會(huì)和他一起去實(shí)驗(yàn)室，有的時(shí)候就呆在家里看看電視。當(dāng)時(shí)心里挺不高興的，覺得一點(diǎn)也享受不到懷孕的特權(quán)（笑）。后來(lái)在差不多懷孕8個(gè)月的時(shí)候，我媽媽就來(lái)美國(guó)探親了。她每天做飯，我就樂(lè)得清閑了。
2005年春天，孩子出生了，是個(gè)大胖小子,大家都很高興。先生打趣地說(shuō):好不容易作了一回美國(guó)人他爹。小生命的到來(lái)給我們帶來(lái)了無(wú)窮的歡樂(lè)，但是也很辛苦。晚上孩子一哭，我就要爬起來(lái)。剛開始先生也被折磨得特別累，因?yàn)樗滋爝€要做研究，我很心疼，就勸他夜里不要起來(lái)。當(dāng)然要不是我媽媽在幫助，真是不知道怎么辦才好。
孩子一天天長(zhǎng)大，我就有點(diǎn)在家呆不住了。我覺得這樣不行，因?yàn)榭偸遣蛔x書人就要廢掉了，于是，我萌發(fā)了申請(qǐng)學(xué)校的念頭。但是實(shí)在不想讀博士了，那樣五六年投入時(shí)間太長(zhǎng)，我打算讀個(gè)短平快好找工作的專業(yè)。一次在中國(guó)學(xué)生會(huì)舉辦的聚會(huì)上，我聽別人說(shuō)讀會(huì)計(jì)學(xué)挺好找工作的，于是就和先生商量。他剛開始有點(diǎn)猶豫，因?yàn)樽x這個(gè)專業(yè)沒有獎(jiǎng)學(xué)金，后來(lái)再仔細(xì)想想，也就同意了。年輕的時(shí)候還是要讀書啊。
明確了這個(gè)目標(biāo)了之后，我就開始準(zhǔn)備GRE和托福了，在這里沒有新東方那樣的氛圍。書本丟了好幾年重新?lián)炱饋?lái)還是有些難度的。我上個(gè)月考完了托福，感覺還不錯(cuò)，現(xiàn)在正在準(zhǔn)備GRE。雖然生活有些艱辛，我每天早晨起來(lái)還是挺開心的，覺得有目標(biāo)，有追求。
如果你要問(wèn)我后不后悔出國(guó)陪讀這個(gè)選擇，我覺得并不后悔。因?yàn)橐郧敖?jīng)歷都挺順的，我想出來(lái)體會(huì)一點(diǎn)艱辛也沒有什么不好。爸爸一直鼓勵(lì)我年輕的時(shí)候吃點(diǎn)苦沒有什么不好，而且先生讀博士那么辛苦，我這點(diǎn)累也不算什么。我想人還是要向前看，很多東西現(xiàn)在可能看不清，等將來(lái)回過(guò)頭來(lái)看，應(yīng)該是挺值得。
奉勸一些準(zhǔn)備到美國(guó)來(lái)陪讀的女孩子，如果你吃不了苦，要三思而后行。如果有機(jī)會(huì)，多學(xué)些本事也不錯(cuò)。
先生回國(guó),我卻留在了日本
在山東大學(xué)做教師的安小姐怎么也沒想到要陪先生去日本。并且比先生呆的時(shí)間還要長(zhǎng)。
安小姐的丈夫在中國(guó)社會(huì)科學(xué)院讀博士時(shí)，參加了中日聯(lián)合培訓(xùn)的一個(gè)項(xiàng)目，并被學(xué)校派去日本研修，這個(gè)項(xiàng)目帶有26萬(wàn)日元的獎(jiǎng)學(xué)金，本來(lái)以學(xué)生身份是不能帶家屬的，但丈夫在去日本之前把邀請(qǐng)函、護(hù)照等材料全部復(fù)印了一份，嘗試著向日本使館申請(qǐng)了“留學(xué)滯在”身份，就是家屬的陪讀，沒想到很快就批下來(lái)了。
丈夫走后，安小姐開始邊辦簽證邊學(xué)日語(yǔ)，由于各種手續(xù)比較完善，簽證辦起來(lái)也比較順利，沒遇到什么波折。就這樣，丈夫去日本半年后，安小姐也到了日本。
到日本后，由于丈夫的獎(jiǎng)學(xué)金足夠兩個(gè)人在日本的生活費(fèi)用了，安小姐沒有像其他陪讀者一樣去打工，而是在家照顧著丈夫的生活。但是，由于語(yǔ)言障礙，在買菜、購(gòu)物中她根本聽不懂別人在說(shuō)什么，學(xué)會(huì)和別人交流是她到日本首要面臨的問(wèn)題。當(dāng)時(shí)，她們居住的公寓小區(qū)內(nèi)有很多留學(xué)生，也有很多像她一樣的陪讀者，為幫助大家溝通，社區(qū)就成立了幫外國(guó)人學(xué)日語(yǔ)的小組，小組成員全部是社區(qū)內(nèi)的志愿者或者日本的家庭主婦，她也加入這個(gè)日語(yǔ)學(xué)習(xí)小組一對(duì)一的開始接受日本的家庭語(yǔ)言幫教。每到一個(gè)家庭拜訪后她都用紙記下所有的對(duì)話回家學(xué)習(xí)。當(dāng)時(shí)，日本東京大學(xué)也為留學(xué)生的家屬開設(shè)了免費(fèi)學(xué)日語(yǔ)的訓(xùn)練班，她又抓住這個(gè)機(jī)會(huì)去上課。
丈夫一年學(xué)習(xí)期滿要回國(guó)了。但是安小姐卻面臨一個(gè)歸屬的問(wèn)題:如果隨丈夫回國(guó)自己還要回到山東大學(xué)繼續(xù)做老師，如果丈夫博士畢業(yè)了可以隨他留在北京，但當(dāng)時(shí)離他畢業(yè)還有一段時(shí)間；不回國(guó)的話沒了丈夫的生活費(fèi)自己就要去打工賺錢，而且不能是陪讀身份了。想來(lái)想去，還是想留在日本，等到丈夫畢業(yè)再回國(guó)。
就這樣，丈夫給她留下了到日本后積攢下來(lái)的生活費(fèi)回國(guó)了。因?yàn)樽约涸趪?guó)內(nèi)大學(xué)教師的身份，安小姐作為自費(fèi)研究員的身份留在了丈夫就讀的學(xué)校，學(xué)校只收取很少的費(fèi)用。但這剩下的錢還是不夠支撐她一年的生活，恰巧，她學(xué)日語(yǔ)的學(xué)校貼出了一則招工信息，她馬上去那家餐廳應(yīng)聘。后來(lái)每天的安排就是，上午去自己的研究室搞研究，下午去日語(yǔ)學(xué)校學(xué)日語(yǔ)，晚上就去一家日本人開的中國(guó)料理店打工賺生活費(fèi)。
緊張的生活鍛煉了她很強(qiáng)的耐力，日語(yǔ)水平也得到了提高，她在日本還嘗試著參加日語(yǔ)的水平考試，居然差四分就達(dá)到了最高級(jí)！已經(jīng)回國(guó)的丈夫也被她的成績(jī)嚇了一跳：這個(gè)小女人自己過(guò)得蠻不錯(cuò)嘛。
隨著丈夫博士畢業(yè)，她的“陪讀”生涯也結(jié)束了。
生活有時(shí)候很有戲劇性，不知會(huì)得到什么失去什么。抓緊機(jī)會(huì)充實(shí)自己是陪讀之后的最佳選擇。
留學(xué)熱門國(guó)家陪讀政策
美國(guó):不需經(jīng)濟(jì)擔(dān)保
到美國(guó)去陪讀就要準(zhǔn)備好需要的材料，一般情況下包括本人護(hù)照、配偶護(hù)照復(fù)印件、配偶在美居住證明、結(jié)婚證和配偶邀請(qǐng)函等材料。到美國(guó)陪讀不需要經(jīng)濟(jì)擔(dān)保證明，但會(huì)檢查共同生活的費(fèi)用夠不夠。美國(guó)的陪讀生活比較愜意，陪讀可以選個(gè)專業(yè)上學(xué)，也可以打工。
新西蘭:可以申請(qǐng)?zhí)接H
新西蘭沒有陪讀簽證，按照新西蘭移民局的規(guī)定，新西蘭留學(xué)生的配偶(含17歲以下子女)可以申請(qǐng)到新西蘭探親。如果留學(xué)生課程在一年之內(nèi)的，其配偶只能作為一般旅行者申請(qǐng)；如果留學(xué)時(shí)間超過(guò)一年，其配偶赴新西蘭需取得訪問(wèn)簽證，申請(qǐng)這種簽證需提供經(jīng)濟(jì)擔(dān)保書、體檢報(bào)告、兩人的保證書、結(jié)婚證書以及留學(xué)生支持其配偶赴新西蘭所寫的信件等。
日本:只有夫妻陪讀
在日本只有夫妻陪讀，而且陪讀時(shí)在日本可以工作，但如果要上學(xué)則需要重新申請(qǐng)學(xué)習(xí)簽證。
馬來(lái)西亞:要有存款證明
馬來(lái)西亞原先不存在陪讀。近些年，隨著國(guó)內(nèi)很多家長(zhǎng)把馬來(lái)西亞視為去歐美留學(xué)的“跳板”，馬來(lái)西亞政府采取多項(xiàng)措施鼓勵(lì)外國(guó)學(xué)生到馬來(lái)西亞留學(xué)，包括允許留馬學(xué)生的父母到馬來(lái)西亞陪讀。而之前馬來(lái)西亞政府規(guī)定的25歲以上的中國(guó)女性不獲批入境簽證現(xiàn)在也已被取消。也就是說(shuō)只要有銀行存款證明，也可以通過(guò)夫妻關(guān)系陪讀。
英國(guó):須有足夠資金
想到英國(guó)去陪讀關(guān)鍵是必須有足夠兩個(gè)人生活的錢，如果資金沒問(wèn)題，可以辦攜行，甚至可以兩人一起簽出去。
如果配偶中的一方已到英國(guó)，有些東西就不得不留心準(zhǔn)備了，首先你要讓已經(jīng)在英國(guó)的一方準(zhǔn)備銀行賬單、邀請(qǐng)函、在英國(guó)的住宿證明、電話賬單、簽證復(fù)印件。然后自己在國(guó)內(nèi)也要準(zhǔn)備結(jié)婚證、單位準(zhǔn)假證明。如果在英國(guó)的一方的銀行賬單的收入不足以支付兩人的生活費(fèi)，還要出示存單。英國(guó)的陪讀簽證相對(duì)歐洲大陸國(guó)家來(lái)說(shuō)很好簽，只要錢的方面沒有問(wèn)題，一般都不會(huì)被拒簽。
澳洲:要求比較寬松
也不能失去信用!”
2001年12月中旬，56歲的胡丙申在山西省夏縣鄉(xiāng)鎮(zhèn)企業(yè)局長(zhǎng)的位置上內(nèi)退了，老伴王金梅頗為高興，丈夫退休前忙得和家人在一起的時(shí)間都很少，現(xiàn)在終于可以和她在家里頤養(yǎng)天年了。
可讓王金梅沒想到的是，丈夫退休的第二天，自家小院里便涌來(lái)許多人，這些人既有承包工程的包工頭，也有個(gè)體攤販，更有從鄉(xiāng)下趕來(lái)的農(nóng)民，每個(gè)人都口口聲聲要老胡還他們的欠款。堂堂局長(zhǎng)，竟然欠這么多老百姓的債務(wù)，到底是怎么回事呢?
事情還得從十年前說(shuō)起――
1992年春，為了大力發(fā)展鄉(xiāng)鎮(zhèn)企業(yè)，胡丙申被縣委寄予厚望，從民政局長(zhǎng)的位置上調(diào)任縣鄉(xiāng)鎮(zhèn)企業(yè)局局長(zhǎng)。上任后，胡丙申了解到好多企業(yè)因?yàn)槿鄙倭鲃?dòng)資金已陷于癱瘓和停產(chǎn)，要想盤活現(xiàn)有企業(yè)，必須幫他們解決流動(dòng)資金問(wèn)題。
隨后，胡丙申做通了縣農(nóng)村信用社的工作，為符合放貸條件的企業(yè)爭(zhēng)取到了一定額度的貸款，有一部分企業(yè)其他條件都過(guò)關(guān)，就是找不到擔(dān)保人，胡丙申毫不猶豫地在貸款擔(dān)保書上簽上了自己的名字。
就在這時(shí)，許多不具備貸款條件的企業(yè)也先后找到胡丙申，懇求他利用自己的人際關(guān)系，尋求民間資本支持。于是，胡丙申走訪老干部、建筑商，甚至是個(gè)體攤販和早期致富的農(nóng)民，希望他們拿出閑置的資金，有償支持鄉(xiāng)鎮(zhèn)企業(yè)的發(fā)展。憑著他在群眾中的威信，短短數(shù)天就籌借了69萬(wàn)元，為夏縣中草藥加工廠、四辛莊肉聯(lián)廠、禹王童裝廠等鄉(xiāng)鎮(zhèn)企業(yè)解了燃眉之急。不用說(shuō)，胡丙申也成了所有民間借貸的擔(dān)保人。
胡丙申沒有考慮到的是，早期鄉(xiāng)鎮(zhèn)企業(yè)都是自發(fā)的，帶有很大盲目性。沒過(guò)多久，一些企業(yè)就因產(chǎn)品質(zhì)量不過(guò)關(guān)或經(jīng)營(yíng)管理混亂等原因，紛紛關(guān)門破了產(chǎn)，企業(yè)主們紛紛逃往外地躲債。此時(shí)，借貸矛盾已經(jīng)顯現(xiàn)出來(lái)，只不過(guò)當(dāng)時(shí)胡丙申還在位，大家隱忍不發(fā)，沒有把矛盾激化。當(dāng)胡丙申內(nèi)退的消息不脛而走后，當(dāng)年由他經(jīng)手擔(dān)保借貸的債主們紛紛涌上門來(lái)，找他討債……
一連好幾天，胡家小院里人聲鼎沸，到了晚上，還有人坐著不走，硬要胡丙申給個(gè)說(shuō)法。有的人甚至惡語(yǔ)相加，胡丙申只能賠著笑臉，說(shuō)給他些時(shí)間，讓他想想辦法。
更大的壓力來(lái)自于家庭內(nèi)部，家人當(dāng)初對(duì)胡丙申給人借款擔(dān)保的事就有看法，事情的結(jié)局恰恰印證了家人的擔(dān)心，就連一向溫和的老伴也忍不住數(shù)落丈夫：“你瞅瞅，你都干的什么傻事啊!”
面對(duì)家人白天晚上的輪番質(zhì)詢，胡丙申始終沉默不語(yǔ)。他壓根沒有想到會(huì)出現(xiàn)如此難堪的局面，一向以正直、清廉聞名的大丈夫形象，突然間聲名狼藉，讓他的自尊心受到了極大傷害。
那幾天，面對(duì)債主無(wú)休止地上門討債、兒女們的抱怨和指責(zé)，胡丙申幾次來(lái)到黃河大橋，對(duì)著滔滔黃河水，訴說(shuō)自己的委屈。有時(shí)，他只想縱身一跳，一了百了。可轉(zhuǎn)念一想，債因自己而起，我不能愧對(duì)曾經(jīng)相信我的人，不能愧對(duì)我的親人，尤其不能帶著罵名離開人世。
接下來(lái)，胡丙申選擇了主動(dòng)出擊，他帶著債主去找當(dāng)年的借錢人，讓債務(wù)人擬定還款計(jì)劃。可接連半個(gè)多月跑下來(lái)，除了夏縣植物激素廠等極少數(shù)企業(yè)簽訂還款計(jì)劃并如約履行外，大多數(shù)借款企業(yè)都已破產(chǎn)、倒閉，當(dāng)初的企業(yè)主們有的亡故，有的不知蹤影。于是，這些債款都落在了胡丙申身上。
無(wú)奈，胡丙申和老伴戴上老花鏡，把所有的債務(wù)清單進(jìn)行了整理，核對(duì)了多次，“39萬(wàn)元”的天文數(shù)字驚呆了老兩口。緩過(guò)神后，胡丙申下定了決心：債因我而起，再多的錢也得還!
人急則無(wú)智。胡丙申到鄉(xiāng)下老家清靜了幾天，拿出了周密的還債計(jì)劃。在信用社擔(dān)保的貸款，本金用自己的工資扣還，利息則由自己按季度支付，這樣最終連本帶息還清，約需12年時(shí)間，如果趕上退休工資調(diào)高，還款日期還會(huì)縮短。
2001年元月下旬，胡丙申分組召集債主座談，確定所有民間借貸利息截止到當(dāng)天，連本帶息由他在15年內(nèi)陸續(xù)歸還，希望取得大家的諒解。只是，債主們一致商議，最后把還款期限縮短到10年，胡丙申答應(yīng)了。
胡丙申替人背債39萬(wàn)元的消息很快傳出，在這個(gè)不大的縣城成了特大新聞。有人說(shuō)他憨，也有人說(shuō)他好。對(duì)大家的議論，胡丙申坦然地說(shuō)：“我活著是個(gè)人，倒了還得爬起來(lái)，再怎么難，也不能失去信用!”
寫春聯(lián)、開飯館、學(xué)理發(fā)，
退休局長(zhǎng)攜妻艱辛掙錢還債
2002年2月4號(hào)，農(nóng)歷臘月二十三。山西夏縣縣城街頭，一位頭發(fā)半白的老者坐在長(zhǎng)條桌后面，桌子前面擺著“春聯(lián)”的招牌，他的老伴在旁邊幫著招攬生意。有顧客過(guò)來(lái)，老人就根據(jù)客人的要求，自編自寫，來(lái)求春聯(lián)者絡(luò)繹不絕。有熟悉的人從攤位前走過(guò)，驚呼起來(lái)：“這不是老胡嗎?怎么在街頭賣起字來(lái)了!”
不錯(cuò)，這位被人稱作“老胡”的長(zhǎng)者正是胡丙申，寫春聯(lián)賣字是他為還債邁出的第一步。隨后，“老局長(zhǎng)賣字還債”的消息傳了出去，當(dāng)年胡丙申曾任鄉(xiāng)黨委書記的禹王、胡張、裴介三個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)的村民們，感念胡丙申當(dāng)年的功德，來(lái)縣城辦事的時(shí)候，也不忘過(guò)來(lái)讓老書記寫幾副春聯(lián)帶回家。
這樣一來(lái)，胡丙申的春聯(lián)生意十分火爆。直到大年三十，無(wú)論刮風(fēng)下雪，他都堅(jiān)持出攤。臘月二十八那天，冷風(fēng)如刀，天空飄起了雪花。老伴勸他不要去寫了，胡丙申說(shuō)：“鄉(xiāng)親們進(jìn)城路途遠(yuǎn)，萬(wàn)一來(lái)了求不到春聯(lián)怎么辦?”老伴只好帶上塑料布又陪著他出去守?cái)偂Ｖ形绯燥垥r(shí)，胡丙申也不肯回家，王金梅只好用毛巾裹著飯盒，送來(lái)熱騰騰的飯菜。
經(jīng)過(guò)好心人指點(diǎn)，胡丙申用寫春聯(lián)賺的錢批發(fā)了些花炮，讓老伴負(fù)責(zé)賣炮。一時(shí)，老兩口春聯(lián)、花炮同時(shí)經(jīng)營(yíng)，獲利頗豐，短短幾天居然賺了2000元，初戰(zhàn)告捷讓胡丙申還債信心大增。
2002年春節(jié)剛過(guò)，胡丙申便在縣城找了家小店面，開起了飯館，昔日的一局之長(zhǎng)成了大廚，老伴則是采購(gòu)員、收銀員、服務(wù)員一肩挑。飯館雖小，雜事頗多。每天天不亮，老兩口就爬起來(lái)和面燒水，收拾停當(dāng)還要趕早市買菜，夜里十來(lái)點(diǎn)鐘打烊后打掃衛(wèi)生，最后，還要強(qiáng)撐著盤點(diǎn)一天的收支。
為了省錢，胡丙申都是自己借輛架子車去運(yùn)煤。老伴怕他體力不支，要雇小工，他笑呵呵地說(shuō)，這比當(dāng)年我?guī)ьI(lǐng)村民鋪沙蓋堿輕松多了。運(yùn)煤時(shí)，認(rèn)識(shí)他的人不解地問(wèn)：“胡局長(zhǎng)，你怎么親自拉煤啊？”胡丙申笑著反問(wèn)道：“我為什么就不能親自拉煤呢?”
雖然開著飯店，胡丙申總是舍不得吃，經(jīng)常是壘個(gè)饅頭，上面撒些鹽和辣椒面就算是一頓飯。每當(dāng)看到丈夫省吃儉用，老伴就流著淚勸他：“咱怎么省都行，千萬(wàn)不要在嘴里省。你的身體垮了，這一家老小可指望誰(shuí)呀!”胡丙申總是笑著安慰老伴：“沒事兒，當(dāng)年我這身體打下的老底子硬著哩!”
兩年飯館開下來(lái)，不但錢沒掙多少，胡丙申和老伴卻累瘦了一圈。兒女們心疼父母，不讓他們?cè)匍_下去了，并決定湊錢幫父親還債，卻被胡丙申固執(zhí)地拒絕了。
其實(shí)，胡丙申一直覺得對(duì)兒女們心里有愧。他當(dāng)局長(zhǎng)多年，大兒子參軍提干是自己奮斗的，跟他沒任何關(guān)系，女兒至今仍是農(nóng)村戶口，老伴曾經(jīng)想讓他給女兒安排個(gè)工作上班，卻被他以“不能帶頭搞不正之風(fēng)”頂了回去。二兒子當(dāng)兵復(fù)員回來(lái)時(shí)，胡丙申還是民政局局長(zhǎng)，按說(shuō)為城鎮(zhèn)復(fù)員兵安置工作是國(guó)家政策允許范圍內(nèi)的事，給二兒子安置工作也順理成章。老伴提出此事后，不料又被他頂了回來(lái)，他認(rèn)為自己身為民政局長(zhǎng)，會(huì)有利用職權(quán)帶頭為親屬安排工作的嫌疑。兒女們從沒有沾過(guò)他這個(gè)當(dāng)官的爹什么光，憑什么要跟著他受累?
2004年3月，胡丙申關(guān)閉了飯館，在縣城西關(guān)租了間門面，開起了理發(fā)店。因?yàn)榈昝嫘。戆l(fā)師不愿到他這里屈就，胡丙申就拿起理發(fā)工具邊學(xué)邊=F，由于理發(fā)技術(shù)不過(guò)硬，顧客也很少問(wèn)津。一年到頭，胡丙申賺來(lái)的錢除了繳房租之外，幾乎剩不下錢來(lái)。
2005年春節(jié)后，胡丙申將理發(fā)店關(guān)停，轉(zhuǎn)而經(jīng)營(yíng)起了百貨小超市，大到面粉、調(diào)和油，小到針頭線腦，經(jīng)營(yíng)種類應(yīng)有盡有。胡丙申讓老伴守店，他天天騎著三輪車巡回于縣城幾家較大的批發(fā)部進(jìn)貨。為了節(jié)省每一分錢，出門他都是杯子里灌些白開水，從不舍得買瓶礦泉水，餓了就吃隨身帶的大餅。
遇到進(jìn)貨量大的時(shí)候，為了低幾分錢的進(jìn)價(jià)，胡。丙申就騎著摩托車到運(yùn)城市批發(fā)市場(chǎng)進(jìn)貨，早出晚歸，一去就是一天，在外面不舍得吃飯，回到家吃飯后還得硬撐著身子點(diǎn)貨擺貨。
2005年冬天的一個(gè)傍晚，胡丙申從運(yùn)城進(jìn)貨回來(lái)，老伴看到他臉色蒼白，疲憊不堪，趕庀把他扶到床上，就要去請(qǐng)大夫。胡丙申虛弱地?cái)[擺手說(shuō)： “不礙事，休息會(huì)兒就好。白天在運(yùn)城進(jìn)貨時(shí)，我突然感到眼前一黑，天旋地轉(zhuǎn)，我扶著電桿喘了一會(huì)兒就好了!”
王金梅用熱毛巾擦著老伴的臉，有些后怕地說(shuō)：“多危險(xiǎn)啊，身邊又沒有親人。咱們休息幾天，到醫(yī)院檢查一下吧!”胡丙申開玩笑地說(shuō)： “估計(jì)是‘腦血栓’找我來(lái)了，一看我還有這么多債要還，就高抬貴手把我放了。”
王金梅被老伴逗樂(lè)了，繼而又心酸地流起了淚。
“信義”二字何止千金!
老夫妻打工十年終償巨債
2006年，受朋友之邀，胡丙申到運(yùn)城參與《五千年文明河?xùn)|人系列叢書》的編撰工作。這份工作不僅能讓胡丙申發(fā)揮自己的寫作特長(zhǎng)，也有了一份穩(wěn)定的收入。更讓他欣喜的是，自己的退休工資也從退休時(shí)的六七百元調(diào)高到2000多元，從此，胡丙申的“還債”計(jì)劃駛?cè)肓恕翱燔嚨馈薄?/p>
老伴被邀至運(yùn)城編書后，王金梅并沒有閑著。秋收時(shí)期，她瞞著家人悄悄回到馮村老家，今天給東家摘棉花，明天給西家挖紅薯，甚至連拆房、砌墻的活兒她也搶著干，為的就是一天能賺到20元的辛苦費(fèi)。
好事的鄉(xiāng)親把王金梅的行動(dòng)告訴了她的兒女們，孩子們怕母親累壞了，強(qiáng)行到鄉(xiāng)下把母親“請(qǐng)了回來(lái)”。王金梅閑不住，又來(lái)到運(yùn)城，在勞務(wù)市場(chǎng)找了份給人當(dāng)保姆的活兒，每月能掙500元的工資。
值得一提的是，憑著日積月累吃苦受罪打零工，王金梅十年間給老伴掙了2萬(wàn)多元的還債錢。這個(gè)善良而又傳統(tǒng)的中國(guó)女性，用行動(dòng)詮釋著相濡以沫、患難與共的夫妻情。
自從參與叢書的編寫后，“胡丙申充分發(fā)揮了自己的人脈關(guān)系和寫作特長(zhǎng)，超額完成采編任務(wù)，并享受到一份不菲的獎(jiǎng)金。多年打工還債經(jīng)歷，讓胡丙申對(duì)世事、人生有了更為深刻的感悟。編輯叢書期間，他晚上堅(jiān)持寫作，文章不斷發(fā)表在《河?xùn)|文學(xué)》、《運(yùn)城日?qǐng)?bào)》、《黃河晨報(bào)》等報(bào)刊上，僅《夏縣人》一家雜志10年間就刊發(fā)了胡丙申詩(shī)歌、散文、雜文等近百篇文章，他也是在用這種方式告訴債權(quán)人：“我胡丙申還活著，請(qǐng)大家放心。”
2009年12月，信用社打電話讓胡丙申來(lái)取他的工資本，告訴他信用社的貸款已從工資本上扣完。聽到這個(gè)好消息，胡丙申頓時(shí)精神一振。在信用社取工資本時(shí)，他受到了全體工作人員的熱情接待。信用社主任握著他的手說(shuō)：“如果貸款人都能像你這樣，我們的工作就好做了。”
讓胡丙申更欣慰的是，信用社貸款還清的同時(shí)，其他債務(wù)也已基本還清。2010年歲尾，經(jīng)過(guò)十年的臥薪嘗膽，胡丙申終于趕在年終最后一天還上了最后一筆“債務(wù)”。當(dāng)他把兩摞嶄新的百元大鈔遞到對(duì)方手中時(shí)，債權(quán)人感動(dòng)得說(shuō)不出話來(lái)。胡丙申感到了一種前所未有的輕松。
2011年元旦這一天，胡丙申10年來(lái)破天荒地拉著老伴上街買衣服，享受著無(wú)債一身輕的感覺。老伴說(shuō)，應(yīng)該給你先買，你的棉衣和外罩從里到外都是補(bǔ)丁。
的確，十年間，胡丙申沒有給自己添過(guò)一件新衣服，棉衣、棉褲可說(shuō)是補(bǔ)丁上摞著補(bǔ)丁。孩子們買的新衣服他也不穿，他說(shuō)這叫臥薪嘗膽。不但如此，他抽煙也從最初的五塊錢“紅河”，降到兩塊五的“哈德門”。胡丙申還自我解嘲說(shuō)：“魯迅最愛抽‘哈德門，我特別崇拜魯迅。”
那天逛完街回到家，胡丙申把老伴讓到沙發(fā)上，用一種欣賞的眼光久久看著她。王金梅嗔怪他說(shuō)：“你這是咋啦?不認(rèn)識(shí)我了!胡丙申沒說(shuō)話，輕輕打開眼鏡盒，取出一張兩萬(wàn)元的定期存單交到老伴手里。
王金梅看著存單一頭霧水。胡丙申深情地說(shuō)：“老伴啊，這10年你跟著我受苦了，我怕我撐不下來(lái)，半道上走了，還債的同時(shí)悄悄存了兩萬(wàn)元，想給你留個(gè)保命錢。”王金梅感動(dòng)得熱淚盈眶。原來(lái)，胡丙申連最壞的結(jié)果都想到了，而在那樣的壓力下，他心里依然牽掛著妻子，王金梅抱著丈夫失聲痛哭。
胡丙申輕聲安慰老伴說(shuō)：“過(guò)去了，一切都過(guò)去了，我們老兩口也要開始新的生活。工資本在咱們手上，錢怎么花全聽你的。”王金梅破涕為笑道：“咱倆每年旅游一個(gè)地方，爭(zhēng)取跑遍全中國(guó)。”胡丙申補(bǔ)充道：“跑遍全世界。”
看著胡丙申孩子似的神情，王金梅欣慰極了。當(dāng)年，她出生于一個(gè)富商家庭，在“唯成分論”的那個(gè)時(shí)代，25歲已當(dāng)上村支部書記的胡丙申冒著政治前程受影響的壓力，毅然和她結(jié)了婚。老兩口相濡以沫地過(guò)了大半生，老伴有難，她不幫他誰(shuí)幫他啊!